结核分枝杆菌快检测方法的建立及其fadb4cysd基因的表达.pdfVIP

摘 要 近些年，结核病发病率持续上升，耐药性结核病的增多以及艾滋病在全球范围内迅速蔓 延，传统的结核杆菌检测手段如抗酸染色、分枝杆菌培养、药敏试验与菌种鉴定技术以及抗 体检测等已经远远不能满足临床诊断需求，建立一种简洁而敏感的诊断方法成为防治结核病 迫切需要解决的关键性问题之～。以结核分枝杆菌特有的插入序列IS6110设计巢式PCR引 物，对痰样本结核分枝杆菌的基因组DNA进行扩增，建立检测结核病病原的巢式PCR诊 断方法，采用此方法扩增结核分枝杆菌可以获得244bp的目的片段，以常见病原菌金黄色葡 萄球菌、链球菌、沙门氏菌、大肠杆菌、李氏杆菌、布鲁氏菌等以及无结核病史的痰样本进 行特异性检测，检测结果为阴性；通过扩增不同浓度梯度稀释的模拟阳性痰样本确定其敏感 性，确定了其敏感性为4个质粒拷贝，反应，对送检的41份痰样本采用本方法进行检测，阳 性率为60．98％。 脂类代谢和硫的代谢在结核杆菌的致病性、耐药性和抗氧化防御中起重要作用，结核杆 菌的基因组含多个基因，其中有许多个基因编码脂肪酸代谢相关的酶， fadB4的基因序列 与氧化还原酶和脂肪酸合成酶具有一定的同源性，表达产物和还原性辅酶II相似，可以起 到Ⅱ型去毒酶的作用；cysD基因是编码ATP硫酸化酶腺苷酰亚