一个来自于稻瘟菌的免疫诱导蛋白的鉴定和功能分析.pdfVIP

一个来自于稻瘟病菌的免疫诱导蛋白的鉴定和功能分析 摘要 植物在一定的诱导因子(又称激发子)作用下，产生对随后病原菌侵染的抗性 增强，这种现象称为诱导免疫(inducedimmunity)。激发子本身没有杀菌活性， 但可以通过活化植物体内的免疫机制从而诱导植物产生抗性。近年来，一些微生 物来源的蛋白类免疫诱导因子引起人们的广泛关注。这类激发子对植物无毒、作 用剂量小、环境友好，因而在开发环境友好型作物瘸害免疫诱导翔中具有广阔前 景。本项目从稻瘟病菌中分离鉴定了1个免疫诱导蛋白基因MgSMI，采用农杆菌 介导的瞬间表达技术以及转基因技术研究了MgSMl蛋白的免疫诱导活性及其可 能的机毽。 根据其他微生物中SMl基因的序列信息，采用生物信息学方法克隆了稻瘟病 氨酸：硫键。RT-PCR分析表明，MgSMl在稻瘟病菌侵染水稻过程中有明显的表 达；另外MgSMl基因在稻瘟菌的整个生活史中都有表达。 MgSMl年LAG构建克隆进由DEX诱导表达型启动子驱动目的基因表达的 plNDEX3双元质粒中。采蔫农杼蓊余导瞬闻表达方法，分析了MgSMl在普通烟、 本氏烟、番茄、拟南芥和水稻等不同植物上的免疫诱导活性。结果表明，在农杆 菌注射并经DEX诱导处理后，供试植物在短时间内(处理后6小时)注射叶片 组织发生过敏性反应(hypersensitivityresponse，礤乏，导致细胞死亡，组织麓溃。 在普通烟、本氏烟、番茄、拟南芥和水稻等植物叶片上，MgSMl的瞬间表达可引 起注射叶片中活性氧的产生，注射叶片的电导率升高，HR指示基因表达增强。 这些结果说雳，MgSMl可以在多种植物上弓l起HR反应。 为了明确MgSMI处理后，不同植物植株是否激活体内防卫反应并提高抗病 性，分析了MgSMl处理植株体内防卫基因的表达并测定了上部叶片的抗病性。 2 植株的注射叶片PR基因表达上调，而且在注射叶片上部非注射叶片中PR基因也 出现上调表达。这些结果说明，MgSMl作用震不仅激活了注射时片局部组织的 防卫反应，而且也活化了未处理叶片组织中的防卫反应。抗瘸性测定结果显示， 在注射MgSMl并经DEX诱导处理的番茄中，上部未处理叶片上接种灰霉菌 (Botrytis 诱导处理的拟南芥植株中，上部叶片上接种晨cinerea和Pseudomonas pv． syringae Pst DC3000引起的瘸害症状和细菌蘑量也明最低于对照。这些结果说明，MgSMl 作用艨，通过激滋植拣体内的防卫基因表达，提离了植株对多种病害的抗病性。 为了进一步研究MgSMl在调控抗病反应中的功能，我们将MgSMl基因导 入拟鸯芥，经抗缝分离筛选和分子鉴定获得3个单拷贝撬入的过量表达MgSMl 转基趿纯合株系(匏、孬7和#1 1。在未经DEX处理时，MgSMl转基因植株与野 生型植株无明显形态和发育上的差异。在DEX处理后，能检测到MgSMl的表达， 蔼基高浓度DEX处理时植株生长受到抑制，甚至死亡。抗瘸性试验表碉，MgSMl 转基因拟南芥植株增强了对黜DC3000、丑cinerea和Alternariabrassicicola的抗 性。接种触DC3000后，MgSMI转基因植株叶片中病害症状减轻，叶片中细菌 数量泷对照下降2个数量级；喷雾接种霆cinerea后，MgSMl转基因植株瘸害鳙 经摊X处理后，防蔓基因如PR，?、删。2和擞巧等的表达鞠曼上调，对照檀 株中防卫基因表达没有变纯。染色检测表明，DEX处理赝MgSMI转基因檀株叶 片内有显著的过氧化氢和超氧阴离子等活性氯的产生与积累，而对照横株中则未 检测到活性氧的积累。这些结果涯翡，MgSMl终用后，熊激活植株体内防逻基 因表达，并提高檀株对多种瘸害的抗病性。 为了探索MgSMl在诱导抗病反应中可能涉及的信号途径，比较了MgSMI ein2和jarl．j等突变体擅株时片上孳l起的坏死反应明显强予其在野生翟植株叶片 因表达和抗病反巍能力下降，表明MgSMl的俸用需要SA和JA／ET途径的参与。 但是，在fls2．100突变俸中，MgSMl诱导防卫基因裘达和抗病