施氏假单胞杆菌毒死蜱降解酶的基本特性及其制剂的研究.pdf

摘 要 使用有机磷农药高毒品种后，毒死蜱使用更为普遍。有机磷农药残留污染问题是我国乃至世界食 物和环境中的突出问题。有机磷农药残留通过人的食物进入食物链，并在生物体中进行生物富积， 造成致畸、致癌、致突变等危害。本文主要研究有机磷农药残留的酶降解技术，以施氏假单胞杆 菌(Pset阳lomonas 条件的优化，研究了降解酶粗酶液的特性，研制粗酶制剂的剂型，并对粗酶制剂的降解效果进行 了评价，获得了如下具体结果： 1．对施氏假单胞杆菌毒死蜱降解酶进行了细胞定位：定位实验结果表明，胞内提取的酶的降 8．41％。由此推断，施氏假单胞杆菌JH01菌株的毒死蜱降解酶位于菌体细胞内，属于胞内酶。 2．采用L9(34)jE交实验设计优化了降解酶的提取条件：以超声波提取为基础，通过正交设计 优化提取条件。结果明确，施氏假单胞杆菌JHY01菌株经12天的培养，其菌体内降解酶的活性最 最佳提取条件为：菌体重量／缓冲液体积为19／4ml，每次辐射4s，间隔4s，总辐射次数为30 次，在此条件下提取到的酶的活性最高，降解效率可达到84．47％。 3．明确了施氏假单胞杆菌JHY01菌株粗酶的主要特性：测定结果显示，施氏假单胞杆菌 酶活适宜的温度范围为30--50℃，最适温度为40℃；酶活性易受金属离子影响，Cu什、Fe3十、 Mn2+对酶活性有一定的抑制作用；粗酶提取液稀释100倍后没有降解能力。 4．研制了毒死蜱降解酶粗酶制剂的一个新剂型：对拟参与配伍的润湿剂、稳定剂等进行了一 系列筛选，采用正交实验进行制剂配方的优化，实验结果得到的最佳配方为：粗酶液含量为50％， 酶稳定剂为SL，酶稳定剂的含量为2％，润湿剂WS，含量为7．5％，新配制的粗酶水剂于4C下 7．60，于4℃下冷藏7d，其分解率小于5％。 5．粗酶制剂降解效果的初步评价：烟草对毒死蜱喷雾敏感。采用烟草离体叶片法测试制剂对 植物表面污染的修复作用，结果表明，粗酶制剂可以有效地降解烟草叶面附着的毒死蜱农药残留， 粗酶制剂稀释5．10倍仍有显著的效果。粗酶制剂对土壤中残留的毒夕匕蜱也有显著的降解效果，制 剂原液7天的降解效率可达到89％以上，稀释5一10倍的效果可约为57％-65％。 关键词： 施氏假单胞杆菌，降解酶，酶特性，粗酶制剂，降解效果 Abstract isoneofmost is efficient, high Chlorpyrifos importantorganophosphomspesticides(OPs)．It and usedin and is usedafterthe broad—spectrumwidely vegetablesrice．Chlorpyrifosbecomingwidely banned．TheOPs offoodandenvironmentisoneofthewrost in toxicOPswere residue problems highly theworld． Pseudomonas wasstudiedforthe controlof stutzeri Enzymicdegradation pollution OPs．Using JI-IY01strainas researchwas the bacteria，the degradation present focusingon：locatingdegrading and itsextract