小麦抗条锈病品taichung29lt;#39;gt;6yr5的蛋白质组学分析.pdfVIP

捅 要 摘 要 蛋白质组学是生命科学研究的热点和前沿。蛋白质组学的发展是受技术限制的，也是受 技术推动的。目前小麦叶片蛋白质组研究主要采用双向电泳(2．DE)分离和肽质量指纹(PMF) 分析技术。探索新的分离、分析方法，可为更深入全面研究小麦叶片蛋白质组提供技术保证。 二维液相色谱(2D．LC)与2一DE技术具有互补性，本文探讨了利用2D．LC和纳升级液相色谱串 联质谱(NanoLC—MS／MS)技术分离鉴定小麦叶片蛋白质组的新方法。小麦叶片蛋白经提取、 脱盐后，进行第一维阴离子交换分离：收集洗脱组分进行十二烷基硫酸钠．聚丙烯酰胺凝胶电 泳(SDS．PAGE)分析，并对非高丰度蛋白组分进行第二维反相液相色谱分离；随机选择含较 低吸收峰的部分组分经胰蛋白酶水解后进行NanoLC．MS／MS分析；将串联质谱数据通过 MASCOT搜索NCBInr和EsT数据库，并对二级质谱获得的蛋白序列进行MSBLAST分析。结 果表明，经第一维阴离子交换色谱分离，收集得到15个组分，其中第15组分包含小麦叶片丰 度最高的蛋白——1，5．二磷酸核酮糖羧化酶／力口氧酶(RuBisCo)；其余14个组分经反相液相色 谱分离，共收集1551个组分，获得1867个色谱峰；随机对其中6个含较低吸收峰的收集组分酶 解和Nano LC．MS／MS检测，9种蛋白得到鉴定。 小麦条锈病(Puccinia striiformisf．sp．tritici)一直是我国小麦的主要病害，成灾频率高、 流行范围广。利用抗病品种是防治小麦条锈病最有效、经济和安全的途径，选育和推广抗病 品种成为控制病害流行的首选措施。但由于病原菌生理小种变异快，品种抗性频繁丧失，抗 病育种始终处于被动应付状态。本文从蛋白质组学角度出发深入研究小麦对条锈病抗性的分 子机理，揭示寄主小麦与病菌之间的互作机制，在小麦抗病品种的培育和利用上具有重要理 论和实际意义。由中国农科院植保所培育的小麦抗条锈病品系Taichun9296／Yr5目前在我国尚 未发现对其致病的条锈菌生理小种。本试验联合应用双向电泳、二维液相色谱和质谱技术， 料，研究其叶片差异表达蛋白质组，以期发现特异的抗病相关蛋白。经双向电泳分析，初步 确定19个差异表达蛋白质点。其中，接种后诱导表达的蛋白质点有8个：上调表达的蛋白质点 有10个；下调表达的蛋白质点有1个：未发现表达被抑制的蛋白质点。经二维液相色谱分析， 初步确定17个差异色谱峰。其中，接种后新出现的色谱峰有1个：峰面积增加的色谱峰有6个； 峰面积减少的色谱峰有9个；缺失的色谱峰有1个。所有差异蛋白组分均进行了质谱分析与数 据库检索，11个蛋白质获得鉴定结果，包含8个与植物源蛋白相匹配的蛋白、2个与真菌蛋白 高度同源的蛋白和1个与假设蛋白高度同源的蛋白。鉴定蚩白的功能主要涉及植物防卫和植物 光合作用。 试验结果表明利用2D．LC和NanoLC．MS／MS技术可有效地分离和鉴定小麦叶片蛋白质 组；同时采用双向电泳和二维液相色谱技术分析小麦抗条锈病品系Taichun9296／Yr5接种条 锈菌CY32的差异表达蛋白质组，能够更全面的获取差异表达蛋白质信息；本文利用小麦抗 条锈病品系Taichun9296／Yr5开展的比较蛋白质组研究工作，为深入理解小麦与条锈病菌的 互作机制提供了重要的基础。 关键词：蛋白质组学；小麦叶片；条锈病；二维液相色谱；纳升级液相色谱串联质谱；双向 电泳；肽质量指纹图谱 VII 东北农业人学农学博卜学位论文 _I Proteomeof ResistantTo AnalysisTaichun929央6／Yr5 WheatRust Stripe Abstract Proteomicsisoneofthehot inlifescienceand