大豆疫霉菌（pytophthora sojae）孢子囊形成过程的基因差异表达研究.pdfVIP

摘要 摘 要 本研究为了寻找一种获得大豆疫霉菌纯营养菌丝的方法，以玻璃纸胡萝卜琼脂培养大豆 孢子囊形成早期(0—7h)的基冈差异表达谱，通过反Northern杂交、克隆、测序、同源比较 及功能分析，初步明确了孢子囊形成过程的调控基因，为从转录水平调控孢子囊的形成打下 理论基础，从而为控制大豆疫霉菌侵染和危害提供一定的依据。研究结果表明： 玻璃纸胡萝卜琼脂培养大豆疫霉菌能获得纯营养菌丝，3h换一次无菌水诱导纯营养菌 丝，7h开始产生孢子囊；试验确定了大豆疫霉菌DDRT-PCR的优化体系，筛选出30对引物 组合，共得剑了稳定的差异条带90条；反Northern杂交验证出阳性差异片段39条，假阳性 结果发现有9条差异片段不存在与之匹配的同源序列，其余27条差异片段与大豆疫霉菌、致 病疫霉菌、芸苔根肿菌和烟草黑胫病菌中已克隆到的许多与抗逆、菌丝及孢子生长、侵染、 繁殖等有关的EST具有很高的同源性，27条差异片段中只有9条与已知基因和蛋白序列具 有同源性。 推测其可能编码长醇磷酸甘露糖转移酶，与细胞壁的形成有关，调控甘露糖的转化，为细胞 推测其可能编码自体吞噬蛋白基因，参与大豆疫霉菌自体吞噬过程，为菌丝顶端生长和孢子 75％，推测其可能编码Rab5基因，调节泡囊的形成，为菌丝顶端生长和孢子囊的生成提供泡 码衰老相关蛋白，通过E3泛素连接酶调控大豆疫霉菌的衰老过程。 821103．1有36％同源性，推测其可能参 差异片段GRl-373与二酰基甘油酰基转移酶XP 其可能与有毒代谢物运出细胞外有关；差异片段CR。．289与核糖核蛋白体结合蛋白基因 XM001654574．1同源性为83％，推测其可能编码核糖核蛋白体结合蛋白基因，但该蛋白的具 001618281．1有72％的同源性，推测 体功能未查到；差异片段GRl9．366与假定蛋白基因XP 其可能编码假定蛋白，但该蛋白的具体功能也未查到。 玻璃纸；胡萝卜琼脂 Abstract I of onDifferential Genes Study Expression Sporangium sojaeDuring Pbtophthora FormationProcess Abstract andcarrotmediumto This used isolates agar grow studyPhytophthorasojae usingcellophane abundant tothe ofdifferential inearlystage(0-7h) mycelium．andanalyzedprofile genesexpressed differential watercondition mRNA of formationundersterilized byusing display sporangium wasidentifiedtotheeffectof m reverse PCR．T