小麦穗发芽抗性关vp1和dfr基因的等位变异、表达与调控的分子解析.pdfVIP

摘要 小麦成熟期穗发芽影响小麦产量和品质，是世界性的自然灾害，已成为我国小麦生产的重要 限制因子之一。深入研究穗发芽抗性机理，对穗发芽抗性育种具有重要意义。本研究围绕小麦抗 穗发芽相关坳J(Viviparous 小麦代表性品种的坳J基因变异类型分析(2)小麦近缘种中坳J变异类型及表达特性分析，了 解坳J基因变异的起源与进化，剖析近缘种中场J基因的表达与小麦穗发芽抗性的关系；(3)小 麦DFR基因的等位变异及表达研究，探讨红粒小麦的抗穗发芽机理：(4)场J启动子在小麦中的 功能分析，鉴定相关应答元件的功能，明确启动子的组织特异性，并探讨激素应答和调节在小麦 穗发芽抗性中的作用。主要研究结果如下： bp和6bp的缺失及5个SNP。不同等位基因类型的品种ABA 外，坳M厂在该区域还分别有2 还检测出3B染色体上存在两种坳佃等位变异类型，一种为VplBc，另一种为新发现类型，命名 为场J助。与VplBa相比，坳J助在第三内含子处具有83bp的碱基缺失，3bp的碱基插入，9bp 利用提供了依据。 2．小麦近缘种坳J基因的克隆与表达特性分析：在小麦近缘种中克隆并鉴定了11个新的坳J 基因等位变异类型，其中，各有3个来自于栽培一粒小麦和野生一粒小麦的A严基因组(TmVplAl， 分别来自野生一粒小麦B01。B03，B05)； 2个等位变异来自硬粒小麦B基因组(TduVplBl， 基因具有相似的结构，但在内含子和外显子处均有片段的插入、缺失及SNP存在。对不同等位变 异类型进行半定量RT-PCR的结果表明，其表达均有选择性剪切方式现象发生，且不同变异类型 正常转录本的表达量存在差异，其中，野生一粒小麦的Am基因组TbVplAZ表达量要远高于 且正确剪切转录本相对于非正确剪切的表达量要有所下降。硬粒小麦B基因组TduVplB2的表达 缘种ABA敏感性的分析结果表明，具有较高表达量的等位基因的品种同样具有较高的ABA敏感 明，小麦近缘种中vpl等位基因及其表达特性与品种的ABA敏感性直接相关，其中ABA敏感性 较高的近缘属种可做为小麦穗发芽抗性育种基因资源加以利用。 3．红粒小麦DFR基因变异与穗发芽抗性研究：在抗感穗发芽红粒小麦品种3B染色体上发现 编码区没有差异，但TaDFR-Bb基因在启动子-230bp至-23vbp处有8bp的插入和在第一个内含 为TaDFR-Bb基因型，而表现为感穗发芽的品种则为其他2种基因型。根据该8bp插入设计显性 标记DFRBb，用102份红粒小麦材料进行验证，结果表明，该标记可以有效区分具有不同穗发芽 抗性的红粒小麦品种基因型，可用于红粒小麦穗发芽抗性种质资源的筛选和分子标记辅助育种。 不同变异类型与DFR基因表达关系正在进一步研究中。 4．小麦场J启动子的功能分析：对已经分离的坳J基因上游2232bp的序列进行生物信息学 动子不同区段融合GUS报告基因的植物表达载体。通过农杆菌介导转化四倍体小麦Stewart，并 获得转基因植株。对转基因小麦的分析结果表明，该启动子可有效启动GUS基因在花药、糊粉 层、穗轴及根中表达，其他组织中没有表达，表现为组织特异性。当启动子片段大于660bp时外 源ABA可诱导启动子启动GUS基因在茎节中表达。小麦场J启动子的分离和功能分析为进一步 解析小麦坳J基因的调控表达和其所介导的穗发芽抗性机制提供了依据。 关键词：普if,J,麦，小麦近缘种，穗发芽，坳J基因，启动子，DFR基因，等位变异，分子标记 Ⅱ Abstract Pre-harvest andeconomic reducesthe valueof isa sprouting(PHS)greatlyquality wheat咖．It occurs toclimatic and aroundtheworld．Tounderstandthemechanisms response widespread