杨梅树皮有效成抗肿瘤活性的体外研究.pdf

浙江大学博士论文 摘要 摘要 rubraSieb．et 杨梅(Myrica Zucc)是杨梅科杨梅属水果，喜湿、耐阴寒，为 我国主要果树之一。杨梅树皮中含有多酚、黄酮、二芳基庚烷、单宁、三萜等具 有多种药理活性的化合物。本文采用人肝癌细胞(HepG2)、人膀胱癌细胞 细胞株进行体外培养，研究了杨梅树皮提取物和其主要特征性成分(杨梅素、杨 梅苷等)的抗癌活性，发现它们普遍具有良好的抑制肿瘤细胞体外增殖的活性和 诱导肿瘤细胞凋亡的作用，尤其是杨梅素与杨梅苷联用在PC一3细胞上表现出极 显著的协同增效作用，确定了二者配合的最佳比例关系，并对其协同作用机制进 行了研究。同时，在B16细胞的试验研究中，杨梅苷表现出可与熊果苷媲美的 美白潜力。主要研究结论如下： (1)杨梅树皮醇提物经由正丁醇萃取得到正丁醇分级相(BuE)和水分级 相(WaE)，分别测定了两相的多酚、总黄酮含量(W慌)。WaE中多酚和总黄 gg／mL。通过 表明WaE和BuE的半抑制浓度(IC50)分别为164．8“g／mL、114．8 高效液相色谱法分析，鉴定BuE中主要成分为杨梅素、杨梅苷和槲皮素，并测 得BuE中杨梅素、杨梅苷和槲皮素的含量(W／％)分别为3．75％社0．s8％、 29．28％士1．27％、6．06％4-0．355％，摩尔比为1：5．35：1．7。 (2)对人肝癌细胞HepG2的体外抑制试验发现，BuE具有较强的细胞增殖 抑制作用。在杨梅素、杨梅苷、杨梅素+杨梅苷(1：1摩尔比)三组试样中，杨梅 苷的效果最弱。培养24h时，杨梅素、杨梅苷、杨梅素+杨梅苷对HepG2的细胞 增殖的IC50分别为841．03ItmolFL、1578．13gmol／L、652．79tmaol／L；培养48h时， 三者的IC50分别为321．67Ixmol／L、908．20}tmol／L、286．92pmol／L，而同期BuE 独使用杨梅素(浓度为300 gmol／L时抑制率分别为52．88％、48．82％)，未表现 有效成分对HepG2细胞的增殖抑制具有时问依赖关系。同时，通过Annexin 浙江大学博士论文 摘要 V-FITC／PI双染法检测，表明三组试样能诱导HepG2细胞的凋亡，并呈现剂量依 赖关系；高浓度(300 pmol／L)时，杨梅素、杨梅苷、杨梅素+杨梅苷的诱导细 胞凋亡率分别为38．04％、13．77％、38．67％；杨梅素与杨梅苷联用对细胞的早期 诱导凋亡作用较强，单独使用杨梅素则对细胞的晚期诱导凋亡作用较强。 (3)对人膀胱癌细胞YTS—l的体外增殖抑制试验表明，培养48h时，杨梅 0 素、杨梅苷、杨梅素+杨梅苷的IC50分别为240．1 gmol／L、378．82 gmol／L、272．05 98．95 1．06 grnol／L、209．15llrnol／L、25grnol／L， gmol／L；培养72h时，IC50分别为1 表明三组试样对YTS．1细胞的增殖抑制作用均具有时间依赖性，杨梅素与杨梅 苷联用并未表现出协同增效作用。同时，采用PI染色法对YTS．1进行细胞周期 检测，发现高浓度(300 limol／L)时，三组试样对YTS．1细胞的G2／M期具有显 著的阻滞作用(P0．01)。另外，在诱导YTS一1细胞凋亡的试验中发现，低浓度 (37．5 gmol／L)时三组样品对YTS．1细胞的诱导凋亡作用不强，而高浓度(300 的诱导细胞凋亡率分别达31．70％、25．50％、25．19