棉铃虫中肠cda文库的构建、v-atp酶亚基b基因的克隆与功能研究.pdfVIP

摘要 昆虫中肠是苏云金芽孢杆菌Bacillus 肠受体的结合是毒素发挥作用所必需的，中肠受体的变化被认为是昆虫产生抗性的主要机制。随 着Bt棉的大面积推广，棉铃虫Helicoverpa 期有效地利用，所以了解Bt抗性的分子机制是非常重要的。为了进一步明确棉铃虫对Bt产生抗 性的机制，为制定抗性治理策略和延长Bt棉的使用寿命提供重要的理论依据，我们构建了棉铃 ATP酶亚基基因；因 虫中肠的cDNA文库；而且通过对文库的筛选，我们发现了很多Vacuolar 为已有报道Vacuolar 虫中肠的V-ATP酶亚基B基因，并对其功能进行了初步研究。主要结果如下： Mechanismat5’endoftheRNA l、运用RNA转录过程中的5’末端转换机制(Switching 106 kb，全长率为50％，最终成功得到1098条表达 pfu／mL，重组率为100％，平均插入片段大于l 序列标签(expressedsequencetags，ESTs)序列，文库的各项指标均达到要求。 cDNA序列。该cDNA序列长2091 bp，开放阅读框为1485 号肽，也没有发现潜在的C端GPI锚定位点。序列同源性分析发现，该序列与烟芽夜蛾的同源性最 非常保守。 CrylB毒素进行Ligand 毒素混合后饲喂棉铃虫幼虫，生物学测定结果表明，与单独取食CrylAc毒素的棉铃虫相比，取食 响。 4、荧光定量PCR结果表明，不同发育时期V-ATP酶亚基B基因的表达量不同，成虫的表达量最 高，其次是幼虫，在蛹中的表达量最低。在肠道不同部位的的表达量也有一定的差异，前肠与中 肠表达量的差异不显著，但明显比后肠的表达量高。不同品系V-ATP酶亚基B基因的表达量差异 对CrylAc产生抗性相关有待进一步验证。 blot，生物学测定，荧光定量 关键词：棉铃虫，中肠，eDNA文库，V-ATP酶亚基B，Ligand Il Abstract The ofimectisthemainaction toBacillus oftheBt midgut position to larval is for of toxins inthe Bt thealterations specific midgutrequired toxicity,and receptors are mechanismsofBtresistance．Asthe areaofBt toxin-bindingreceptorsreported勰main growing hasbeen resistance ofcottonbollworm cotton increasingrapidly,theproblem Helicoverpa transgenic nseof it Bthasbecomethemainrestrictionfor effectiveBtcotton．So armigera(Htlbner)to