玉米芯固定化米霉直接深层发酵l-乳酸的研究.pdfVIP

摘要 三．乳酸应用广泛，特别是近些年发现￡哥L酸能聚合形成可生物降解的聚三一 乳酸(PLA)，而PLA有望在将来替代PVC、PP等各种无法生物降解的塑料，消 除“白色污染，为此发酵生产三．乳酸展现出巨大的应用前景。玉米芯是玉米加 工工程中的废弃物，目前只有小部分用于培养食用菌、生产木糖、酿酒等，绝大 部分是作为农家燃料直接烧掉，其利用价值有待于进一步开发。本文采用玉米芯 作为部分替代碳源及载体固定化米根霉发酵￡．乳酸，研究并优化其发酵工艺条 件，探讨丝状真菌固定化发酵中菌丝及载体形态变化与产物积累的关系，为其工 业化应用打下理论及实践基础，主要研究内容及结果如下： 利用刚果红平板对实验室保藏的16株的米根霉乳酸高产株进行筛选，获得 出发菌株R-1；紫外诱变菌株R-1，玉米芯为唯一碳源平板初筛获能利用玉米芯 原料的突变株；建立并利用牛津杯玉米芯溴甲酚绿平板复筛方法(改良牛津杯 法)，定量筛选出能利用玉米芯的高产突变株R-1-4，经摇瓶产酸验证，改良牛津 杯法能快速准确筛出目标菌株；突变株R-14玉米芯固体发酵试验结果显示，玉 米芯利用率达14．9％，超过其它高纤维素酶活菌株，适于玉米芯原料发酵。 以玉米芯原料及固定化载体发酵，经L9(34)的正交设计优化，培养基中添加 酵48h，L．乳酸积累量最高达到32．239／L，糖酸转化率达80．58％。进一步研究玉 米芯与葡萄糖混合发酵时的最佳比例，两者1：4混合时，葡萄糖对三．乳酸的转化 率高达82．5％，较纯葡萄糖发酵提高了14．6％；玉米芯最佳粉碎细度为40目时， 米根霉R．1．4发酵混合碳源产酸达到34．689／L，并形成直径为0．5～1．0ram具有连 续发酵能力的固定化菌丝球，连续发酵6批，葡萄糖对三．乳酸的平均转化率为 81．3％。 显微观察茵丝球表面及内部形态，可以发现，菌丝从外到内逐渐疏松，形成 了有利于产物积累的四层结构，从微观角度解释了玉米芯固定化形成的菌丝球促 进产酸的原因，为研究米根霉发酵过程中菌丝形态对发酵的影响提供了形态学依 据。电镜对比研究玉米芯发酵前后形态，发现未发酵的玉米芯为纤维聚集态结构， 大分子链段排列规整、结构紧密，缝隙，孔洞较少、相互间结合能力强，而发酵 后玉米芯规整结构被打乱、孔洞增多、较松散。玉米芯在发酵前后被利用现象明 显，从微观角度证明了玉米芯作为部分发酵碳源被利用。 米根霉R-1．4以上述优化条件，在IOL全自动发酵罐中进行发酵试验，绘制 模型，采取origin8．1软件进行拟合，建立了较为理想的玉米芯固定化米根霉直 接深层发酵三．乳酸的菌体生长、产物生成、基质消耗动力学方程，三个数学模 型拟合程度高，能很好地反映米根霉R-1-4的固定化发酵过程，为R-l-4放大投 产及最优化控制提供了理论依据。 关键词：玉米芯；米根霉；L．乳酸发酵；菌丝球；固定化；发酵动力学 n AB STRACT has of L-lacticacid a诚de rangeapplication,particularlyPoly三．1acticacid(PLA) was acid foundinrecent hasthe polymerized谢廿l三-lactic years，which SOthat to allkindsofnot biodegradableproperty expectedreplace biodegradable suchas etcinthe eliminate plastic PVC，PP future，and the”white pollution”，