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基因工程原理及技术 下面收录了对基因的五个定义 1,基因是存在于细胞内有自我繁殖能力的遗传单位. 2,基因是一个具有遗传功能的特定核苷酸序列的DNA片段. 3,编码一个RNA或一条多肽链的DNA片段称为一个基因. 4,基因是生物体遗传的基本单位,存在于细胞的染色体上,作直线排列. 5,基因是生物体内一切具有自主复制能力的最小遗传功能单位,其物质基础是一条以直线排列具有特定核苷酸序列的核酸片段. 基因的结构 2. 基因及其产物的共线性 基因决定蛋白质的序列组成，是由密码子对应特定氨基酸所决定的。当一个基因的核苷酸序列与其产物的氨基酸序列是一一对应时，则表明它们是共线性的。 3. 基因及其产物的非共线性 由于真核生物的断裂基因具有内含子，使得一个基因的核苷酸序列与其产物的氨基酸序列不是一一对应关系，则表明基因及其产物是非共线性的。 内含子（intron)： 指真核生物基因中不能翻译成蛋白质的DNA片段，但可被转录。当外显子转录的RNA被剪接在一起时，就将内含子转录的RNA从整个转录物中除去。内含子不是一成不变的，具有相对性。 外显子（extron)： 外显子是指能够翻译成蛋白质的任一间断的基因片段，一个基因可有多个外显子。 内含子的发现 内含子的生物学意义 ?在真核生物的基因中普遍存在着内含子，既然它不编码，那么其生物学意义何在？在长期的进化过程中为什么它尚能保留安然无恙呢？Gilbert（1978年）指出：断裂基因的存在可能有两种意义：（1）有利于储存较多的遗传信息，如SV40的T和t蛋白；（2）有利于变异和进化，若在交界序列处发生突变，就可能影响正常的剪切方式从而使蛋白的结构发生较大的变化。除此之外内含子还有以下的作用： ??? 1. 有的内含子可编码内切酶。酵母的细胞色素b基因含有3个外显子(417bp，14bp和100bp)和两个内含子(765bp和1240bp)，转录成mRNA后首先切除了内含子1，形成未成熟的mRNA。核糖体结合在这种mRNA，利用外显子1，2和内含子2的部分序列（5‘端840Nt）为模板，翻译成长为423aa的一种蛋白，叫成熟酶(maturase)，此酶回过头来又可将未成熟的mRNA中的内含子2切除掉，产生成熟的mRNA，最终以此mRNA为模板翻译成细胞色素b（279aa）细胞色素bN端的144aa和成熟酶N端的144aa是同源的（图10-44）。 ? 另一个例子是酵母w蛋白内含子的归巢(Homing)。酵母中有两种不同的品系w+和w, w+有内含子，而w-在相应的位置上无内含子。若将w+品系和w-进行杂交，按一般规律合子为w+/w-，经减数分裂后应产生2个w+孢子和2个w-的孢子。但实际结果是所有的孢子都是w+。这是如何产生的呢？此是由于ω+品系的内含子可以编码一种内切酶，在靶位点将w-基因的DNA切开，而此内含子可以反转录成DNA双链，插入到切开的靶位点上，连接后使w-变成了w+，这个过程就称为内含子的归巢(Homing)。 ??? 2.? 调控 在内含子的相对性中我们举了SV40的T和t蛋白，以及大鼠肌钙蛋白的两种类型，从中可以看出真核基因组中虽然没有重叠基因，但通过内含子的相对性可使相同的一段DNA编码不同的蛋白，起到了调控的作用，并增加了遗传信息的储存。 ?? 3. 提高进化速率 蛋白质的三维结构与内含子和外显子的分布有密切的相关性。外显子常常对应于蛋白质的折迭区域(proteinfolding domains)或功能域(function domains)。如免疫球蛋白和b珠蛋白分子的各个结构域和外显子的分布是一致的。在进化中，外显子是稳定的，内含子的序列和长度是迅速随机突变的。重组易发生在外显子之间的内含子之中，这样可形成蛋白结构域的新组合，而减少在外显子上发生重组，若发生这样的重组可能导致蛋白质功能的破坏，内含子的存在提高了有效重组。在原核生物中，没有有性生殖的过程，不发生减数分裂，因此也不存在真核生物相互交换的同源重组，-只发生部分外基因子和完整内基因子之间的单向重组。无论是转化还是结合，无论是转导还是转座都发生在编码区中，仅l噬菌体的整合发生在基因间的att位点，这些重组往往会改变原核生物的性状。原核生物诸多机能都倾向一个字：“变”。只有多变才能适应环境的改变，抵抗宿主的限制和抗生素的作用。因此无内含子是有利的。真核生物诸多机能都倾向于“稳”。因在长期的进化中，真核生物已产生了复杂的结构和各种系统适应了环境，新的变化常常对生物是不利的。 由于内含子的存在，在此区发生的非法交换可以产生基因的重复，而进化中形成了基因族及同工酶的基因，在原核生物的基因组中没有内含子就不可能产生结构基因的重复