3.脂多糖诱导巨噬细胞自噬相关LC3B-GFP荧光聚集体的形成.pdfVIP

安徽医科大学学报 ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2012Apr；47(4) ‘357 · 脂多糖诱导巨噬细胞 自噬相关LC3B-GFP荧光聚集体的形成 张 梅 ，黄保军 ，胡梅琮 ，程艳伟 ，宋 蔚 ，黄大可 ，李 群 ，胡春松 摘要 目的 构建pEGFP—C1／LC3B重组质粒并转染小鼠巨 GFP融 合 基 因并 稳 定 转 染 小 鼠 巨 噬 细 胞 噬细胞 RAW264．7，观察脂多糖 (LPS)诱导其 自噬相关 RAW264．7，通过激光共聚焦显微镜检测 LPS诱导 LC3B—GFP荧光聚集体形成的过程。方法 根据编码小鼠 LC3．GFP荧光聚集体的形成过程，为进一步研究 自 微管相关蛋白1轻链 3B(LC3B)的开放读码框 (ORF)设计 噬在固有免疫应答中发生的确切机制及信号转导通 引物 ，RT—PCR扩增小 鼠LC3B的 ORF，构建 pEGFP—C1／ 路打下坚实的基础。 LC3B重组质粒；脂质体法转染并筛选稳定表达RAW264．7 细胞株，荧光显微镜观察及 Westernblot鉴定 LC3B—GFP融