中草药提取物对种植物病原菌的抗菌活性研究.pdf

摘 要 以苹果炭疽病菌、番茄枯萎病菌、梨黑星病菌为供试病菌，对7种中草 药提取物的抗菌活性进行了研究，并且对不同提取方法进行了探讨，研究结 果如下： 1．不同提取方法的提取率及提取物抗菌活性表明，不同溶剂提取效率均 以索氏抽提法和超声波法为高；同种提取方法以氧仿、95％7,醇提取效率高。 从提取物抗菌活性来看，同种溶剂不同提取方法提取物活性差异不大，但以 索氏提取物和超声波提取物抗菌活性略高。实验室提取可以95％乙醇做溶剂 采用超声波法提取较为理想。 2．7种中药材提取物对供试植物病原菌的抗菌活性研究表明，中药材 CCB对苹果炭疽病菌有良好的抑制作用，氯仿、95％乙醇提取物抑菌效果在 72h时，对苹果炭疽病菌的EC50分别为0 54749几、1．47859／L：95％乙醇提取 物经过液液分配得到有机相和水相，其石油醚相和乙酸乙酯相抑制效果较好， 其EC50分别为2．90929lL、O．3246譬，L，说明抗菌活性物质极性中等偏低；乙 酸乙酯相进一步柱层析，得到不同馏分，生测结果表明乙酸乙酯洗脱c1馏 分活性最强，ECsn为O 0589／L，进一步说明活性成分的极性为中等：cl馏分 用制备型薄层分离，在254nm紫外光下观察，Rf=0．5处有一个红色带，经过 生测其对苹果炭疽病菌的EC50为0．189／L，而分离的色素进行生测活性很低， 说明Rf=0．5的组分为实验跟踪的活性成分。 3．中药材CCB鲜样、干样及植株不同部位活性研究表明，植株干样、 鲜样对苹果炭疽病菌的抑制作用没有差异，但其整株活性明显高于植株各个 器官部分(根、茎、叶)的活性，根、茎、叶提取物中以叶的活性最差。 4．中药材CCB与化学药剂比较研究表明，中药材CCB提取物对苹果炭 疽病菌的抑制作用低于化学药剂多菌灵、代森锰锌，后者对苹果炭疽病菌的 mg／L．而中药材CCB柱层析C1馏分的EC50 EC50分别为O．13mg／L、24．4728 为58 mg／L，制各型薄层分离得到的活性物质的EC50为180mg／L。 5．中药材CCB粗提物活体实验表明，其对苹果炭疽病具有一定的保护 和治疗作用，但保护作用优于治疗作用，且在浸果1d后接菌保护作用最高。 以多菌灵做参比，中药材CCB粗提物在10∥L浓度下防效与多菌灵(100mg／L) 防效相当，甚至略高，持效期比多菌灵短，但两种药剂总体防效都不是很高， 有待进一步研究其他的作用机理。 6．中药材CCB抗菌活性成分的分离、鉴定。对其95％乙醇提取物采用 系列极性溶剂液液分配，活性成分进行柱层析，进行梯度洗脱，不同馏分结 合生测确定活性馏分为C1，活性馏分c1经过制备薄层分离得到本实验跟踪 的活性组分。薄层分离以苯：甲醇(28：5)为展开剂，上行展开，活性组分 的Rt,=0．5。比较薄层分离组分和柱层析C1馏分的紫外吸收光谱，具有相同 进行HPLC分析，均有一个明显的主峰，保留时间分别为2．716min、2．843min； 活性组分进行GC分析得到一个主峰13．363min。为了进一步明确活性组分， 进行GC—MS分析，从总离子流图上看到11．88min、12．83min两个离子峰， 分别对这两个峰进行质谱分析，具有相同的分子离子峰m／e286，基峰分别为 120．9、133．9，对比质谱图库得到两个离子峰为黄酮类、黄酮醇类化合物，这 一结果与前面的紫外吸收光谱、化学性状相一致。 关键词：中草药提取物，苹果炭疽病菌，番茄枯萎病菌，梨黑星病菌， 抗菌活性，活性组分分离， 鉴定 ABSTRACT Inthis wereconductedtoscreenthe paper，studies antifungalactivityof solventextractfromsevenkindsherbsonthethree organic plantpathogen (kpnturia inaequalis(Cooke)Wine，F