一氧化氮对采后原真菌botrytis cinerea的生长发育影响及机制研究.pdf

A Dissertation for the Degree of Master Effects of nitric oxide on the growth, development and pathogenicity of postharvest pathogen Botrytis cinerea By Wang Qian Supervised by Associate Prof. Li Miao Anhui Agricultural University Hefei 230036, P. R. China June, 2013 摘要 灰霉菌（Botrytis cinerea ）作为主要的采后致病菌之一，能引起多种果蔬腐 烂病害，从而造成严重的经济损失。一氧化氮（nitricoxide,NO ）是生物体内一种 多功能信号分子，具有独特的理化性质和生物学活性，近年来成为生命科学领域 研究的热点，NO 对细胞同时具有毒性和保护作用，这两种功能主要依赖于其浓 度大小的变化，即高浓度的 NO 对细胞正常生长活动具有抑制作用，使得细胞加 速衰老死亡。已有研究显示，外源 NO 对一些植物病原菌的生长具有一定抑制作 用。为探讨 NO 的抑菌机理及其在果蔬采后病害防治中的应用，本文以硝普钠 （sodium nitroprusside, SNP ）为NO 供体，系统研究了不同浓度 NO 处理对采后 灰霉菌生长发育和致病性的影响，并从细胞生理学、生物化学与分子生物学水平 探讨了 NO 抑制灰霉菌生长发育和降低致病性的可能机制，所获主要结果具体报 道如下： 1. 通过 NO 的抑菌试验结果表明，浓度为 4 mmol/L 的NO 供体 SNP 对灰霉 菌生长具有明显的抑制作用，其抑制效果与处理浓度、处理时间呈现正相关性。 2. 通过 Propidium Iodide 对孢子细胞染色分析，证实了 3 mmol/L 的NO 供 体 SNP 处理破坏孢子细胞质膜，引起胞外可溶性糖、可溶性蛋白和丙二醛含量 增加，导致 B. cinerea 孢子细胞质膜受到损伤，从而抑制了 B. cinerea 的生长。 3. 通过荧光探针二氯荧光素（DCHF-DA ）检测胞内活性氧发现，NO 处理 后的 B. cinerea 孢子胞内活性氧水平上升；此外，通过细胞内抗氧化酶类活性和 抗氧化物质含量的测定，发现孢子细胞内抗氧化系统被破坏，B. cinerea 细胞的 抗氧化能力和细胞功能被削弱，从而抑制了 B. cinerea 的孢子的萌发。 4. 用 NO 处理采后番茄果实，发现 NO 能有效延缓果实成熟衰老，推迟呼吸 跃变时间，降低呼吸跃变的强度，另外，NO 处理还能维持番茄果实内较高的抗 氧化酶活性，增强了果实的抗病性，有利于保持番茄果实品质。 关键词：一氧化氮 Botrytis cinerea 活性氧 氧化损伤 I Abstract Botrytis cinerea is one of the major postharvest pathogens in plants, it can cause great heavy economic losses. Nitric oxide (NO) is a kind of unique and signaling molecule, playing an important role in cells. It has both toxicity and protective functi