小麦抗旱相关基taabc1l的克隆、表达分析及snp标记开发和定位.pdfVIP

摘要 小麦是我国的主要粮食作物，干旱缺水是影响小麦产量的重要因素。认识小麦 的抗旱机制，培育小麦抗旱新品种，充分发挥小麦的抗旱增产潜力，是最为经济有 效的途径之一。克隆和分离抗旱相关基因是利用基因工程技术改良小麦抗旱性的基 础。将功能基因开发成分子标记，将加速分子标记辅助选择。单核苷酸多态性(SNP) 是迄今为止发现的最丰富的DNA多态性，开发功能基因的SNP标记具有重要的理 论与实践意义。 mRNA的错 ABCl蛋白在酵母中位于细胞核或线粒体上，能够抑制细胞色素b 误翻译，并在bel复合体的电子转移过程中发挥关键作用，可能是一类新的分子伴 侣。ABCI基因不仅可以在bel复合体装配中起重要作用，而且对线粒体膜呼吸链上 的复合体II、Ⅲ、Ⅳ的活性都有影响。目前，在植物中仅有克隆AtABCI基因的报道， 但尚无关于该基因功能的报道。 本研究通过筛选小麦品种早选lO号幼苗水分胁迫诱导表达的eDNA文库，获得 抗旱相关候选EST；克隆了小麦ABCl基因，分析了该基因在不同非生物胁迫条件 下的时间特异性表达模式；以2份普通六倍体小麦(AABBDD)、3份小麦的二倍 TaABCIL部分基因组序列的SNP，设计了基因组特异引物和等位基因特异引物，开 XOpataSs)为材料，分别将该基因定位于3A、3B和3D染色体长臂上。 具体研究结果如下： (1)以小麦幼苗水分胁迫1h诱导表达eDNA文库中的WSISICl66EST克隆 框的终止密码子UAA和UAG。 向线粒体转移肽序列，属于类ABCl(ABCl-like)家族基因。 同胁迫条件下，该基因表达高峰出现的时问和表达强度存在差异。其中，TaABCIL 受高盐胁迫时表达高峰出现得最早，且表达强度最高；而受ABA诱导时，其表达高 峰时的强度最低，仅为对照的2倍。 OpataS5及小麦二倍体野生近缘种中的SNP，将六倍体小麦中分离到的基因序列分为 很好的对应性。 并从六倍体小麦中成功分离出各基因组的特异序列。 (6)以中国春缺四体为材料，利用基因组特异引物将硎固C儿基因初步定位 于小麦第三同源染色体群上。 I型、II型序列Mse I、SalI酶切位点的差异，设计出CAPS标记；根据两个亲本 haplotypel]I型序列单个碱基的差异，利用引入错配碱基策略，开发出等位基因特异 PCR(AS-PCR)标记。 之间。 总之，TaABCIL基因对盐、低温、渗透胁迫和ABA处理均表现为上调表达，基 于SNP分析所开发的CAPS标记和AS．PCR标记，将该基因定位于小麦遗传图谱的第三 同源染色体群上。 关键词：小麦；ABCI基因；克隆；表达特性；SNP标记；遗传定位 ABSTRACT a food inthe aestuvum Wheat(TriticumL．)isstaple crop world，but and limitsthe ofwheat．Itisoneoftheeconomical droughtseriously yield effectual tO andutilizethe in approachsimprove drought-tolerantpotential in involvedin tolerance isof wheat．Cloningkeygenes drought plants on the toleranceof via significan