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- 2016-02-25 发布于贵州
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应用rnai技抗烟草病毒及病毒检测技术研究
目 录
摘要…………………………………………………………………………………III
Abstract．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．IV
第一章绪论………………………………………………………………………l
1．1烟草病毒病发生危害及防治概况…………………………………………．．1
1．2转基因植物抗病毒策略……………………………………………………．．2
1．2。1蛋白介导的病毒抗性…………………………………………………2
1．2．2RNA介导的病毒抗性…………………………………………………2
1-3RNA介导的病毒抗性……………………………………………………．．3
1．3．1RNA干扰………………………………………………………………．3
1．3．2
siRNA在植物病毒抗性方面的应用…………………………………．4
1．3．3
miRNA在植物病毒抗性方面的应用…………………………………6
1。4病毒检测方法研究进展……………………………………………………．．7
1．4．1生物学方法……………………………………………………………8
1．4．2电子显微镜方法………………………………………………………8
1．4．3血清学方法……………………………………………………………8
1．4．4分子生物学方法………………………………………………………9
chain
1．4．5多重RT-PCR(reversetranscription—polymerase
reaction)……．10
1．5研究的目的和意义…………………………………………………………11
第二章应用RNAi技术培育抗病毒烟草……………………………12
2．1材料与方法…………………………………………………………………12
2．1．1材料…………………………………………………………………．．12
2．1．2试剂配制方法…………．……………………………………………．13
2．1．3方法………………………………………………………………………………………．．17
T
2．2结果与分析…………………………………………………………………24
2．2．1嵌合基因的设计与合成……………………………………………．．24
2．2．2植物表达载体构建…………………………………………………．．25
2．2．3转基因烟草的获得…………………………………………………．．29
2．2．4转基因烟草的PCR检测……………………………………………29
2．2．5转基因烟草的抗性检测……………………………………………一31
2．3结论与讨论…………………………………………………………………33
2．3．1结论…………………………………………………………………．．33
2．3．2讨论…………………………………………………………………………………………34
第三章烟草主要病毒一步法多重RT-PCR检测技术研究……．35
3．1材料与方法…………………………………………………………………35
3．1．1材料…………………………………………………………………．．35
3．1．2方法…………………………………………………………………………………………36
3．2结果与分析…………………………………………………………………39
3．2．1一步法单重和三重RT-PCR…………………………………………39
3．3结论与讨论…………………………………………………………………46
3．3．1结论……………
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