大茂山苏云金芽杆菌的分离、鉴定及杀虫基因的克隆.pdf

摘 要 摘 要 苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis ，Bt ）是目前世界范围内应用最广泛，的一 种生防微生物，对人畜及非靶标昆虫无害，具有巨大的经济价值和生态价值。为了克服 害虫抗性发生、Bt 杀虫图谱窄等问题，筛选具有高效杀虫活性的新型Bt 基因就具有了 非常重要的现实意义。 本研究选取河北省大茂山地区为土壤样品采集地区，以地表以下5 公分的腐殖土作 为采集对象，根据不同海拔高度，共采集土壤样品 784 份，利用温度-抗生素筛选法分 离得到76 株分离菌株。显微观察结果表明这些菌株的伴孢晶体包括菱形、圆形、方形、 椭圆形、不规则形等多种形态，充分体现了大茂山地区Bt 资源的丰富及多样性。 采用 PCR-RFLP 体系对分离获得的 76 株分离菌株进行基因鉴定，结果发现含有 cry1 、cry2、cry3、cry8、cry9、cry26、cry1I 和vip 共8 种基因型，其中包含有cry8 类 基因的菌株最多，有34 株，另外12 株包含有cry1 类基因，5 株包含有cry2 类基因、2 株包含有cry3 类基因、7 株包含有cry9