水稻突变体库的建和旁邻序列分析.pdfVIP

摘要 水稻是世界上最重要的粮食作物，水稻转基因研究和实践证明，通过基因工程改良， 能够显著增强水稻对病虫害的抗性和对逆境的耐受能力。这就要求发现和克隆出更多新的 功能基因和表达调控关键因子。随着水稻基因组测序的完成，基因库中已积累了海量的数 据，大量基因功能需要确定。水稻功能基因组学的研究迫在眉睫，破译天书，分离具有自 主知识产权的基因，成为世界各国竞争的焦点。随着测序技术的发展和旁邻序列分离效率 的提高，构建水稻插入突变体库成为研究基因功能的有效方法。本研究选择国际水稻基因 组测序品种日本晴为受体材料，将玉米的转座子AC／DS分别导入水稻基因组，利用转座子 双因子系统，构建了水稻转座子突变体库。对转基因植株进行了分子分析，旁邻序列的克 隆与分析，并对突变体进行了遗传分析和生物信息学的研究。取得了以下结果： AC的植株50多株。 2、分子检测结果表明：转DS的植株的阳性率为95％，转AC的转化植株的PCR结果， 阳性率只有40％。PCR检测结果与Basta鉴定结果一致。 3、对田间突变体的调查和统计结果显示，插入突变体主要表现为：1)叶色与光合作用： 苗期白化，淡绿、深绿，条纹(斑马纹，竖条纹)，叶绿素含量：2)株高：特矮(10cm) 抽穗期：早30天．迟30天：6)不育一可育；7)籽粒：粒重，颖壳色，米质等。 株能扩增出特异的旁邻水稻基因组序列，并对其中的109条旁邻序列进行了测序。 5、对这109条旁邻序列的分析和定位结果表明：有26条序列插入基因的编码区，83条 插入基因间的非编码区，有部分T-DNA的右边界序列丢失。成功地将41个单拷贝DS 插入位点的旁邻序列定位在水稻12条染色体的不同区段，构建了T-DNA的插入图谱。 ： 个散布于水稻12条染色体的转座子锚定系。 组氨酸转运蛋白的同源性达96％。T835植株的DS插入区域，极有可能是水稻基因组 的编码转运蛋白的基因的编码区。突变体T319旁邻序列位于FGEN／ESH1．1预测的基 因的两个外显之间。突变体T331的旁邻序列和突变体T415的旁邻序列都位于 FGENESH 1．1预测的两个基因之间的非编码区。 关键词：转座子，水稻突变体库，水稻功能基因组学，旁邻序列，转座子锚定系 Abstract isone Rice ofthemost food importantcropsworldwide．Byusing tmnsgenic approaches， itis toincreaseresistance and to the possible toleranceof againstpestspathogens，andimprove rice to and New inthe plantsdroughtsalinity． regulatory genes，includinggenes tobediscoveredtowardsthese the signal—transductionpathways，need objectives．With ofrice dealof datahas