棉花黄萎病菌致类型快速检测技术的研究.pdf

摘要 棉花黄萎病菌根据引起的症状类型和分子生物学特点，可以分为落叶型黄萎病菌和 非落叶型黄萎病菌，落叶型黄萎病菌造成的危害远远大于非落叶型黄萎病菌，建立一套 不经对病原物进行分离培养就能快速检测土壤、植株和种子内棉花黄萎病菌致病类型的 方法，对于棉花黄萎病菌的检测、诊断、检疫、抗病育种及品种合理布局都具有十分重 要的意义。本文用试剂盒对土壤、植株及种子的总DNA 进行提取，用落叶型特异性引 物 DB19/DB22 、DB19/espdef01 和非落叶型特异性引物NDf/NDr 、InND2f/InND2r ，通 过巢式 PCR 扩增建立起了一套棉花黄萎病菌的快速检测技术，可以对土壤、植株、种 子内的黄萎病菌及其致病类型进行快速检测，并具有高度的准确性和特异性。 土壤检测查明，用Soil DNA Isolation kit （MO BIO Laboratories,Inc 生产）对带菌土 壤总DNA 进行提取，用上述引物可准确地检测出土壤中的黄萎病菌及其致病类型，对 3 个孢子/克，对非落叶型土壤检测下限为土 落叶型土壤检测下限为土壤中菌量密度为10