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油菜生物柴油的酶促合成新技术研究 摘 要 当前，生物柴油作为环境友好、可以再生的清洁液体燃料之一，正倍受世界 各国的关注和开发利用。生物柴油的生产原料主要是植物油脂。油菜由于具有许 多独特的优势而成为我国发展生物柴油比较理想的原料油来源。 在生物柴油的各种生产方法中，生物酶法最有前景。但现己开发的生物酶法 大多存在生产成本高、酶寿命短、反应速度慢和转酯率低等瓶颈问题而难以实现 产业化。因此，急需开发具有产业化前景的生物柴油酶促合成新技术。 本论文从降低成本、改善酶反应体系入手，以菜籽油为原料，先建立了能快 速、准确地判断生物柴油合成反应程度的气相色谱分析法，然后循序渐进地研究 了有机溶剂．水双液相体系、有机溶剂微水体系以及无溶剂体系中酶促菜籽油醇 解合成生物柴油的机理和工艺条件，继而创新性地开发出了醇解催化酶再生技术 和菜籽油酶促交酯化技术，经过精制后获得了符合有关标准的生物柴油产品。 1．建立了快速准确测定油菜生物柴油合成反应程度的气相色谱法 油菜生物柴油的主要成分是棕榈酸甲酯、硬脂酸甲酯、油酸甲酯、亚油酸甲 酯、亚麻酸甲酯、花生一烯酸甲酯和芥酸甲酯。实验表明，它们具有良好分离 温至240℃并保持5min。在此条件下以十三酸甲酯为内标，能快速准确地测得产 品中各脂肪酸甲酯的含量和反应程度。 2．研究了有机溶剂．水双液相体系中菜籽油酶促醇解的机理与工艺条件 TLIM酶比 正交试验结果表明，在有机溶剂．水双液相体系中，Lipozyme 435酶更有效地催化菜籽油的醇解反应；在醇油摩尔比4：l、温度40C、 Novozym 甲醇分三次加入时，其最佳醇解反应条件是：溶剂(石油醚)3mL／g、TLIM酶 度显著的三阶多项式回归关系；油脂的醇解反应伴随有油脂水解负反应发生，使 得反应转酯率最多只有75％左右。 3．研究了有机溶剂微水体系中菜籽油酶促醇解的机理与工艺条件 TLIM酶为催化剂、以不同质量等级的油脂为原料、以不同短 以Lipozyme 碳醇为酰基受体，研究了有机溶剂微水体系中菜籽油酶促醇解生产生物柴油的机 理和工艺条件。正交实验结果表明，油脂的醇解反应伴随有油脂水解反应和脂肪 酸酯化反应；四级油是比一级油、二级油和三级油更好的生物柴油原料油，乙醇 是比甲醇更好的酰基受体；其最佳反应条件是：以四级油为原料、添加20％的 此时的转酯率达到86．2％。 4．创立了无溶剂体系中菜籽油醇解催化酶再生技术，并优化了工艺条件 以四级菜籽油为原料，考察了无溶剂体系中酶种类、短碳醇种类、温度、时 间以及酶再生剂种类等对醇解反应程度和酶活稳定性的影响。结果表明，固定化 435表现出更好的醇解催化行为，乙醇是比 脂肪酶LipozymeTLIM比Novozym 甲醇具有更好综合优势的酰基受体，ZSJI是比ZSJ2具有更好再生效果的酶活再 生剂，30℃最有利于酶活激发并维持酶活稳定的适宜温度。对反应系统中的酶进 行定期再生处理，可使反应时间缩短到9h，此时的酶促醇解转酯率达到90％以 上，而且酶被重复应用15批次后的相对活力仍保持在96％以上。 5．创立了菜籽油酶促交酯化制备生物柴油的新技术 基于菜籽油酶促醇解的转酯率不够高、酶活稳定性不够理想、酶再生操作麻 烦，创立了菜籽油酶促交酯化制各生物柴油的新技术。先考察了酶种类、酶量、 底物摩尔比、温度、时间对交酯化反应的影响，然后应用二次回归正交旋转组合 试验法对酶量、底物摩尔比、温度、时间等因素进行了优化设计，回归模型为： “ --2．7990X32--2．7490X42 研究结果表明，在交酯化反应体系中，固定化酶LipozymeTLIM比Novozym 435表现出更好的催化行为；四级菜籽油酶促交酯化的最佳工艺条件是：40C、 的交酯化率达91．7％，而且酶可以一批接着一批地使用而很少发生酶活损失现象， 从而为酶法生物柴油产业化提供技术依据。 6．研究了油菜生物柴油粗品的碱炼精制工艺条件，得到了基本符合有关生物柴 油标准要求的精制产品。 采用正交优化设计法得到粗品生物柴油的最佳碱炼工