最新内毒素及β-葡聚糖检测.pptVIP

内毒素和1，3-β-D-葡聚糖检测的临床应用 主要内容 内毒素的生物学活性 内毒素的结构 内毒素概述 内毒素是革兰氏阴性细菌细胞壁结构中的脂多糖（LPS），这些成分只在细菌死亡裂解后才释放到菌体外或活菌以发泡形式将其释出。 内毒素的有益作用 内毒素血症产生原因 各类疾病内毒素血症的发生率 肺炎100%、尿路感染70-80%、腹腔感染72-84%、烧伤85%、急性胰腺炎90%、败血症70%、急性肝炎37-64%、暴发性肝炎58-100%、丙肝60%、胆石症伴急性梗阻性化脓性感染85%、多器官功能衰竭100%。 内毒素检测的临床应用 内毒素检测在医院中的应用 内毒素血症的临床症状 内毒素血症临床症状主要决定于宿主对内毒素的抵抗力。 症状和体征有：发热，白细胞数变化，出血倾向，心力衰竭、肾功能减退、肝脏损伤、神经系统症状，以及休克、血压下降、组织灌流不足、缺氧及酸中毒等。 ▲最严重的后果：致死性感染性休克，多器官功能衰竭，DIC等。病死率极高。 内毒素的检测方法 鲎试验是1968年由Levin和Bang建立。其原理是利用鲎的变形细胞与微量内毒素产生凝集反应的现象，作为判断试剂中细菌内毒素含量的一种方法。 内毒素的检测方法 1.凝胶法：鲎试剂与内毒素产生凝集反应的原理来定性检测或半定量内毒素的方法 2.浊度法：利用检测鲎试剂与内毒素反应过程中的浊度变化而测定内毒素含量 3.比色法：利用鲎试剂与内毒素反应过程中产生的凝固酶使特定底物显色释放出的呈色团的多少而测定内毒素含量 4.流式细胞术：测内毒素的量而不是活性 5.化学发光测定法 内毒素的检测原理 革兰阴性菌脂多糖检测试剂盒（光度法） 检测原理：革兰阴性菌脂多糖能激活酶反应主剂中的C因子、B因子、凝固酶原等，引起凝固蛋白原转变成凝固蛋白从而引起吸光度变化，根据检测其溶液吸光度变化对革兰阴性菌脂多糖浓度进行测定。 MB-80微生物快速动态检测系统 内毒素检测的参考值 检测值﹤10pg/ml,阴性。 检测值介于10～20pg/ml之间，临床观察期，建议动态采血检测。 检测值﹥20pg/ml，阳性，建议临床结合症状进行治疗。 检测方法的局限性 只能检测革兰阴性菌脂多糖含量，不能区分细菌种属。 检测样本的采集与保存 检测样本：血液 采集要求：采样过程要求无菌操作，用专用的无热原真空采血管（肝素类抗凝）。常规病人早上用药治疗前空腹采血/取样（血透患者透析前采血）。 样本保存：样本采集后应在3000转/分进行离心，若不能及时检测，应将血浆转移至无热原试管内，在-30℃冰箱中冷冻保存，一周内使用。 特殊标本处理 ：对一般黄疸、溶血、乳糜血标本，稀释2-5倍后进行检测 ；对于严重的黄疸、溶血、乳糜血标本，应重新采血。 干扰因素 1.应用某些抗生素如β-酰胺内酯类、喹诺酮类等患者； 2.一些蛋白：阳离子蛋白如溶菌酶、核糖核酸酶A及人免疫球蛋白G均能与内毒素形成细菌内毒素--蛋白复合体，对细菌内毒素有显著的屏蔽作用，而影响测定内毒素结果； 3.操作环境及操作过程中的污染，可能造成假阳性。 1-3-β-D-葡聚糖本质及特点 (1-3)-β-D-葡聚糖特性 1.对热极为稳定，高压21℃并不能使其灭活。在念珠菌和曲霉菌细胞壁中含量较多，对G试验灵敏。 2.当真菌进入人体血液或深部组织后，经吞噬细胞的吞噬、消化等处理后，(1-3)-β-D-葡聚糖可从胞壁中释放出来，从而使血液及其它体液中含量增高。当真菌在体内含量减少时，机体免疫系统可将其清除。 3.在浅部真菌感染中，(1-3)-β-D-葡聚糖未被释放出来，故其在体液中的量不增高。 侵袭性真菌感染的定义 侵袭性真菌感染( invasive fungal infection, IFI)定义: 指致病性真菌侵犯皮下组织、黏膜、肌肉和内脏器官等所引起的真菌感染性疾病，危害性较大。 侵袭性肺部真菌感染 侵袭性真菌感染的发病率逐年上升,其中又以侵袭性肺部真菌感染最常见,大约占50%～60%。未经及时治疗的肺部真菌感染患者的病死率可高达30% ～80% 。 侵袭性肺部真菌感染 临床表现：缺乏特异性,多表现为发热、咳嗽、咳痰、咳血、胸闷、呼吸困难等。 现状：两高两低一快 高院内感染率和病死率，低临床和实验 室诊断率，患者病情恶化快。 （检测方法相对滞后,早期诊断和治疗仍存在困难,副作用小的新型抗真菌药物价格昂贵,导致病死率高。） 侵袭性真菌感染的诱因 内源