最新第五章固定化酶.pptVIP

Fig. 2.? Kinetic of ROL adsorption on the silica aerogels. The activity was measured using olive oil emulsion as substrate at pH 8.5 and 37?°C. Fig. 4.? Effect of pH on the (A) activity and (B) stability of the free and immobilized ROL. Enzymes activities were assayed at 37?°C using 10?ml olive oil emulsion as substrate.Enzymes were incubated 1?h at different pH for stability study. 葡萄糖酶电极 酶电极示意图 ?－D－葡萄糖＋O2 D－葡萄糖酸－1，5－内酯＋H2O2 半透膜 酶胶层 感应电极 Glucose Gluconic acid Glucose oxidase Oxygen Hydrogen peroxide Membrane Electrode 根据反应中消耗的O2、生成的葡萄糖酸和H2O2的量，可以用氧电极、pH电极和H2O2电极来测定葡萄糖的含量。 手掌型葡萄糖(glucose)分析仪 酶传感器应用实例 ? 测定对象 酶 检测用电极 葡萄糖 麦芽糖 半乳糖 尿素 尿酸 胆甾醇 中性脂质 L-氨基酸 L-精氨酸 L-谷氨酸 L-天（门）冬酰胺 L-赖氨酸 青霉素 苦杏仁苷 硝基化合物 亚硝基化合物 葡萄糖苷酶 淀粉酶 半乳糖酶 脲酶 尿酸酶 胆甾醇氧化酶 蛋白脂酶 L-氨基酸酶 精氨酸酶 谷氨酸脱氢酶 天（门）冬酰胺酶 赖氨酸脱羧酶 青霉素酶 苦杏仁苷酶 硝基还原酶-亚硝基还原酶 亚硝基还原酶 H2O2，O2，I-，pH Pt Pt NH3,CO2，pH O2 H2O2，O2 PH H2O2，O2，I-，NH3 NH3 CO2，,NH4+ NH4+ CO2，, pH CN- NH4+ NH3 第六节 固定化技术的改进 固定化酶的不足之处： ①?固定化时，酶活力有损失； ②?增加了生产的成本； ③适用于小分子底物，对大分子底物不适宜； 一、传统固定化技术的改善 1．采用光、辐射、声等物理新技术来改善固定化条件的方法，以减少酶在固定化过程中活性的损失。 光敏树脂包埋法：如光敏聚乙烯醇光照聚合，条件温和、易控制交联度、固定化时间短。 带光敏性基团的载体共价固定法 等离子体引发丙烯酰胺聚合包埋固定化 超声波固定化方法 低温下60Co辐照冰冻态水溶性单体与酶的水溶液混合体时将使单体聚合与酶固定化同步完成，其回到常温时因冰融化而形成的多孔结构非常有利于底物与产物的扩散。 2. 添加化学试剂来改善固定化载体的性质。 ①改善固定化酶的通透性：加入能够溶出或被微生物分解的试剂。 将光敏预聚物、卡拉胶、海藻酸钠和酶混匀滴入CaCl2溶液中，光照聚合包埋，然后将固化酶通过浸入生理盐水或磷酸盐缓冲液,分别溶出卡拉胶或海藻酸钠，即得通透性改善了的（PVA）载体。 ②提高固定化酶机械性能；添加化学试剂对原有的固定化载体进行硬化处理。 添加聚丙烯酰胺一类聚合物可加强琼脂载体的强度。 在 PVA凝胶制备过程中加入少量活性炭粉末 ,有提高强度增加传质速度的效果 琼脂-陶瓷双介质包埋：用于细胞固定，琼脂是细菌最适培养基 ,有利于保持菌体生物的活性，而陶瓷粒则能增加固定化细胞的强度。 有机聚合物涂缚在无机载体上，兼具了两者的优点 3．? 定向固定化技术 把酶和载体在酶的特定位点上连接起来 ，使酶在载体表面按一定的方向排列，使它的活性位点面朝固体表面的外侧排列，有利于底物进入到酶的活性位点，酶的活力和固定量都有显著提高。 4．多种固定化方法联用 采取吸附 -交联法、包埋-交联法，细胞凝聚-交联法、包埋-共价结合法、二次包埋法等提高固定化产物的多方面的性能。 包埋 -交联法：先用明胶包埋 ,再用戊二醛交联，稳定性有极大提高。 吸附-交联法：离子交换树脂吸附后再用多功能基化合物交联，可提高固定化酶的活性及稳定性，机械性能也较好。 二次包埋法：聚丙烯酰胺凝胶交联过程中放热及单体和交联剂自身的毒性造成细胞及酶的失活现象，先用琼脂包埋细胞 ,再用 PAM包埋的二次固定法。 5．多酶联合固定化技术 充分利用其各自特点 ，把不同来源的酶和整个细胞的生物催化