最新第五章基因工程菌苗研究的现状与.ppt

第六章 基因工程菌苗研究的现状与发展(Status and development of gene engineering bacteria vaccine) 第一节 概述 (Section I outline) 1883年-1885年巴斯德（Pasteur）用理化和生物学方法制备了减毒的炭疽菌苗和狂犬疫苗等。 19世纪以来用菌苗免疫人畜，明显减少了传染病的发生。其中比较成功的是破伤风、白喉类毒素疫苗的应用，其效果可达95%以上。在发达国家破伤风、白喉、百日咳、嗜血性流感的发病率明显降低。抗菌药物的发明和应用，使临床常见的细菌性感染和病死率大幅下降。 第二节 目前应用的菌苗及其存在问题 Present bacteria vaccine and the question 一、目前应用菌苗的类别 (The type of bacteria vaccine) 按菌苗所含的成份，菌苗可分为九类，即减毒的活菌苗、灭活的死菌苗、纯化的多糖或蛋白成份苗、基因缺失活菌苗、载体重组活菌苗、核酸菌苗、联合重组菌苗、多价菌苗、多糖与蛋白结合菌苗。 第三节 重要细菌基因工程苗的研究进展（Development of important gene engineering bacteria vaccine)  现有传统菌苗对重要细菌感染性疾病存在的问题： ①现有菌苗保护效果不好； ②副反应大； ③难以培养的细菌； ④可诱发癌变，有严重后遗症； ⑤新出现的病原体或新变异病原菌。 2）细菌的成份如G-菌的LPS和G+菌的脂肽酸及细菌DNA中没有甲基化的序列等，都有佐剂活性，可增加释放DNA的免疫原性。 3）细菌载体还能进行口服，转染肠相关淋巴组织，促进黏膜免疫效果。他们可停留在吞噬泡中，也可通过分泌溶质膜素破泡而进入胞浆。控制抗原提呈的途径及相应的T细胞亚类的效应反应。 第四节 基因工程菌苗开发战略的几点考虑（Development strategy of gene engineering bacteria vaccine） 1.创新疫苗的研制，开发和应用（preparation，exploitation and application of new vaccine） 近年对疫苗研制的主要贡献之一就是将荚膜多糖与蛋白载体交联起来，研制多糖-蛋白结合苗，使载体蛋白特异的T细胞参与辅助B细胞，产生多糖特异的抗体。解决了长期以来多糖疫苗对2岁以下的婴幼儿无效和无记忆反应的问题。 Hib嗜血流感杆菌-蛋白结合苗，成为WHO的推荐项目，并建议推广至其它荚膜多糖疫苗中去。 4.人类重要病原体基因组测序的完成，将为创新疫苗的研制提供新的机会和条件（supply the new occasion and condition） 5.创新疫苗的研制需要不同学科的协作，理论的融合及各类生物技术包括动物模型的合理使用与创建（collaboration of different subject and fusion of theory ） 1）用肌肉注射或基因枪注入DNA只能转染有限的抗原提呈细胞（APCs），而通过适当的细菌释放DNA，能将质粒DNA特异靶向相关免疫组织的APCs，且除APCs外，还可靶向树突状细胞（DCs），以能更好地进行抗原提呈。 用胞内细菌释放DNA系统也存在危险因素： 1）入侵性虽然利于DNA释放，也存在毒力回复的危险。 2）G-菌的LPS也有毒性问题。 3）释放的DNA有整合到宿主细胞基因组的可能。 1.BS/WC灭活菌苗(BS/WC dead bacteria vaccine ） 由提取的或重组的霍乱毒素B亚单位（BS）及杀死的全菌细胞（WC）组成。 2.CVD103-HgR减毒活菌苗（Levine 1998） 在美国获准，为一次剂量的霍乱活菌苗。它是由霍乱经典型569B菌株构建而成的CVD103减毒株（CTA-B+）。并在其染色体溶血素基因nlyA位点插入汞抗性基因作为筛选标记。 3.以沙门氏菌为载体表达霍乱弧菌O抗原的伤寒/霍乱双价菌苗。 4.O139减毒菌苗候选株CVD112及Bengal-15 表6-5 重组霍乱菌苗的特性 Levine et al(1988b) N.D N.D 100 中等 △ctxA, △hlyA O395(Classical Ogawa) CVD105 Levine et al(1988b) N.D N.Df 40 无 △ctxA,胸腺嘧啶营养缺陷型 O395(Classical Ogawa) CVD102 Kaper et al.