家蚕细胞系(bn)凋亡过程中相关基因的转录特征研究.pdfVIP

家蚕细胞系（BmN ）凋亡过程中相关基因的转录特征研究 中文摘要 家蚕细胞系（BmN ）凋亡过程中相关基因 的转录特征研究 中文摘要 家蚕是重要的经济昆虫，也是典型的模式昆虫。以家蚕为对象研究细胞凋亡 已经有相关的报道，如家蚕的血液能起抗凋亡作用，蜕皮激素能诱发细胞凋亡等。 但与线虫、果蝇、人等模式生物相比，家蚕中的细胞凋亡代谢途径的研究仍处于 起步阶段，以家蚕卵巢细胞系 （BmN ）为材料研究凋亡的报道很少。本研究在体 外诱导因素（H O 和病毒）作用下，通过形态学观察，采用琼脂糖凝胶电泳、实 2 2 时荧光定量PCR （quantitative Real-time PCR, QRT-PCR ）等技术手段对BmN 细胞 凋亡过程中的细胞形态、相关基因的表达水平差异进行了研究，并初步探讨了凋 亡过程中家蚕两种乙酰胆碱酯酶基因（ace 1 和ace2 ）在凋亡过程中的作用，结果 如下。 H O 诱导家蚕BmN 细胞凋亡。BmN 细胞在0.100 mol/L H O 诱导下，3 h 即 2 2 2 2 可在光学和荧光显微镜下观察到凋亡特征，诱导24 h 后，通过琼脂糖凝胶电泳可 观察到DNA 呈明显的梯状条带。QRT-PCR 结果表明，家蚕端粒酶基因（Bombyx mori, telomerase gene, Bmtrt ）在凋亡过程中表达量逐渐降低，家蚕凋亡相关基因 Bmcaspase-5 基因表达量逐渐升高，24 h 表达量为对照的41.942 倍；家蚕P53 基因 (Bmp53)基因表达量先降低后逐渐升高，24 h 表达量为对照的1.592 倍。结果表明 经H O 诱导后，家蚕凋亡相关基因都出现了特征性表达，各基因和凋亡发生的关 2 2 系还待进一步研究。 家蚕核型多角体病毒（Bombyx mori nuclear polyhedrosis virus, BmNPV) 感 8 染家蚕BmN 细胞凋亡。BmNPV 液30 µL （1×10 PFU/mL ）感染家蚕BmN 细胞 24 h ，细胞变圆，边缘光滑，48 h 后表现了明显的细胞凋亡特征。QRT-PCR 结果 显示，凋亡相关基因转录水平有明显变化。Bmcaspase-1、Bmice-5 基因48 h 表达 量上调，分别为对照组表达量的 15.195 倍、6.245 倍；Bmcaspase-5、Bmp53 基因 I 中文摘要 家蚕细胞系（BmN ）凋亡过程中相关基因的转录特征研究 72 h 表达量明显上调，分别为对照组表达量的22.911 倍、4.610 倍；Bmtrt 基因表 达量下调。结果表明，经BmNPV 感染后的BmN 细胞发生凋亡，为研究BmNPV 感染机制提供新的参考信息。 家蚕乙酰胆碱酯酶基因在BmN 细胞凋亡过程中的表达特征。研究了经H O 2 2 和BmNPV 诱导后家蚕乙酰胆碱酯酶基因的表达特征，结果显示，H O 诱导的细 2 2 胞凋亡过程中ace 1 基因表达量逐渐升高，而ace2 表达量降低；BmNPV 感染的细 胞凋亡过程中，ace 1 和ace2 表达量均有不同程度的上调，ace 1 上调表达更加明显。 本研究正常细胞与凋亡细胞中，ace2 基因表达量都高于 ace 1 基因表达量， ace2/ ace 1 最大达到6