转牛生长激素基鸡的研究.pdfVIP

摘 要 论文题目：转牛生长激素基因鸡的研究 专 业：动物遗传育种与繁殖 研 究 生：韦光辉 指导教师：徐廷生 摘 要 生长激素，是由脑垂体前叶嗜酸性细胞分泌的一类单链多肽类激素，它是一 种具有广泛生理功能的生长调节素。能影响几乎所有的组织和细胞，其主要作用 是刺激骨、软骨细胞的生长和分化，调节蛋白质、糖及脂肪的代谢。与动物生长 发育、繁殖等密切相关，目前成为在提高动物生长速度、生长性能等方面研究的 热点之一。本研究将牛生长激素基因功能区的基因片段构建到真核表达载体 pEGFP-N1, 对重组质粒pEGFP-N1-BGH进行脂质体包埋，采用胚盘显微注射法 制备转基因鸡，为培育具有生长速度快、适应能力强等特性以及产业化前景广的 转基因鸡打下基础。研究结果如下： 本研究运用分子生物学技术，提取犊牛脑垂体总 RNA ，利用设计的一对特 异性引物，采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR ）技术扩增出BGH 基因功能区 片段，通过 DNA 重组技术将该基因片段定向克隆到 pEGFP-N1 真核表达载体 CMV 启动子下游，构建 pEGFP-N1-BGH 表达载体。通过 PCR 扩增、酶切和测 序的方法对重组 DNA 进行鉴定。结果显示：应用 RT-PCR 克隆的 BGH 功能区 片段，长度为654bp ；成功构建了pEGFP-N1-BGH 真核表达载体。且BGH 基因 和EGFP 基因读码框一致。 鸡蛋开窗法是鸡胚盘显微注射法的关键技术之一，为此本研究对未转染外源 基因的种蛋开口后进行了 4 种不同的封口方法对孵化率的影响试验。 设置四个 试验组：①蛋壳膜＋封口胶，②蛋壳膜＋蛋壳，③ 蛋壳膜＋石蜡，④蛋壳膜。 同时把未经任何处理的种蛋设置为对照组。结果表明：4 个实验组的鸡胚的孵化 率分别为 10%，18%，8%，2% 。而对照组孵化率为83.3% 。蛋壳膜+蛋壳的封口 方法处理的孵化率相对最高。 采用胚盘纤维注射法进行转染试验，一次注射受精卵 200 枚，孵出小鸡 21 只，孵化率为10.5%，对孵化后死亡的5~7 胚龄的全胚和7 胚龄后的鸡胚的心、 肝、脾、肺、肾、脑、皮肤以及活鸡的血液、皮肤进行检测。荧光检测结果显 示：荧光检测阳性率为3.3% （5/121 ），PCR 检测结果显示：PCR 检测结果阳性 率为2.47% （3/121 ）。 I 摘要 试验结果表明：外源基因通过脂质体的包埋，采用胚盘纤维注射法可获得转 基因鸡，胚盘显微注射法是制备转基因鸡的一条有效途径。 关 键 词：牛；生长激素；显微注射；转基因鸡；EGFP 论文类型：应用基础研究 II 摘要 Subject: The study on transferring bovine growth hormone gene in chicken Specialty: Animal Breeding and Reproduction Name: Wei Guang Hui Supervisor Xu Ting Sheng ABSTRACT Growth hormone is a class of single-chain polypeptide hormone secreted by the anterior pituitary eosinophilic cells, which has a wide range of physiological functions for growth regulators. It promotes the