基因棉粕检测及转基因成分在饲料加工工艺中的降解规律研究.pdfVIP

摘要 越米越多的转基冈产品进入饲料领域，日茄引起人家对饲料安全的关注。本实验从饲料 原料转基冈棉柏入手，研究转基闪棉粕中转基冈成分的提取方法，定性及定量检测转基冈棉 粕中的转基冈成分，并研究干热和湿热处理及湿热膨化等．I：艺对转基冈棉粕中转基冈成分的 降解规律，为转基冈成分的生物安全评价提供科学依据。 分别采川CTAB法、SDS法等方法提取棉粕(籽)基冈，探讨适用丁转基冈棉柏(籽)基因 的提取方法，发现基于SDS的方法更适合棉粕(籽)基冈的提取。对此方法进行改进，开发基 于离心柱型的试剂盒。实验表明，该试剂盒提取时间短，提取基冈纯度高，完全可以满足下 游实验。 采川常规PCR、双重PCR及环介导等温扩增(LAMP)技术对转基冈棉粕进行定性检测。 扩增片段条带清晰，特异性高。常规PCR检测极限为1 00拷贝。对于CrylAb／c基冈及Sadl 基网米说，退火温度在55．5C一58．3。C范嗣内都能扩增出目的基冈片段，扩增效果没有明显 差异。在一个反应体系里同时加入外源基冈和内源基冈的引物，进行双重PCR，并对退火 以后，CrylAb／c基冈检测不剑。对LAMP反应程序进行优化，其检测灵敏度为10拷贝，是 常规PCR反应的10倍。 通过融合PCR方法成功构建了转基冈棉花检测的质粒标准品，建立以基冈特异性为基 础、以拷贝数比为计算方法的转基网棉粕检测方法，并以此对河南等省的转基冈棉粕进行定 量检测。该方法被证明为一种准确的检测方法，可以刚来对转基冈棉花及其副产品进行定量 检测。从各地棉粕转基冈情况来看，在目前检测的儿个地区都含有Bt基冈，除新疆塔城区 及驻马店地区外，其余儿地转基冈8t棉柏外源基冈与内源基冈拷贝数比均人3-50％。 本文对转基冈棉柏进行干热处理和湿热处理，及湿热膨化处理，针对外源基冈和内源基 冈分别设计5对特异性的引物，分析二种处理方式对转基冈成分不同火小片段的降解规律。 结果表明，随着温度升高，转基冈人片段都逐渐降解，但降解的幅度不同。同等条纠：下，湿 热处理对转基冈棉柏的降解作川人丁．干热处理。105C不同时间干热及湿热处理后，各片段 降解差异不人。在湿热膨化中，温度越高，火片段降解越明显。不同的水分比例对各片段的 降解差异不人。对小片段定量分析结果表明，不同条件干热处理后转基冈棉粕外源基冈与内 源基冈的拷贝数比没有明显的变化规律。105C不同时间湿热处理后，外源基冈与内源基冈 的拷贝数比没有明显的变化规律。温度升高时，外源基冈与内源基冈的拷贝数比逐渐降低。 不同比例水分湿热膨化后，外源基冈与内源基冈的拷贝数比没有明显的变化规律。膨化温度 升高后，外源基冈与内源基冈的拷贝数比逐渐降低。 关键词：转基冈棉粕；转基冈成分检测；饲料加’l：；降解 n Abstract Moreandmore feedfieldshas modified(GM)products genetically entering raised aboutfeed this extraction increasingpublicconcerning safety．Inpaper，the and and ofGMcottonseedmeal method，qualitativequalitativeanalysisdegradation feed werestudiedto scientificbasisforthe duringprocessing provide biosafety evaluationofGM system ingredients． CTABandSDSwereused t