棉铃虫alpha;-微管蛋白基因的克隆、序列分析及表达模式检测.pdfVIP

中国农业科学 2013,46(9):1808-1817 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2013.09.008 棉铃虫α-微管蛋白基因的克隆、序列分析及表达模式检测 闫 硕，朱家林，朱威龙，潘李隆，张青文，刘小侠 （中国农业大学农学与生物技术学院昆虫学系，北京 100193） 摘要：【目的】克隆及序列分析棉铃虫（Helicoverpa armigera ）α-微管蛋白基因的 cDNA 序列，并检测棉 铃虫α、β两种微管蛋白基因的表达情况。【方法】以棉铃虫3 龄幼虫为试验材料，采用RT-PCR 及RACE 技术克 隆棉铃虫α-微管蛋白基因（HeTubA），采用荧光定量PCR （QRT-PCR）技术分析棉铃虫α、β-微管蛋白基因在不 同生长发育阶段及成虫器官中的表达模式。【结果】克隆得到棉铃虫α-微管蛋白基因（GenBank 登录号为 JQ069957）。序列分析表明，HeTubA 开放阅读框1 353 bp，编码450 个氨基酸组成的多肽，氨基酸序列包含多个 α-微管蛋白保守区。与其它一些昆虫的一致性分析表明，HeTubA 与八字地老虎（Xestia c-nigrum ）、柑橘凤蝶 （Papilio xuthus ）及家蚕（Bombyx mori ）的α-微管蛋白氨基酸序列同源性最高，α-微管蛋白基因在长期进化 中非常保守。荧光定量PCR 表明，棉铃虫α、β-微管蛋白基因不具有生长发育阶段及成虫器官特异性，且二者均 在复眼表达高，腹部表达低；HeTubA 在末龄幼虫期和蛹期高水平表达，HeTubB 在末龄幼虫期和成虫期高水平表达。 【结论】成功克隆了棉铃虫α-微管蛋白基因，对2 种微管蛋白基因的表达模式进行了检测，进一步进行了蛋白质 3D 结构的构建，可用于深入研究2 种微管蛋白基因的功能及开发新型杀虫剂。 关键词：棉铃虫；α-微管蛋白；β-微管蛋白；基因克隆；基因表达；3D 结构 Molecular Cloning, Sequence Analysis and Expression Pattern Detection of α-Tubulin Gene from Helicoverpa armigera (Hübner) YAN Shuo, ZHU Jia-lin, ZHU Wei-long, PAN Li-long, ZHANG Qing-wen, LIU Xiao-xia (Department of Entomology, College of Agriculture and Biotechnology, China Agricultural University, Be ijing 100193) Abstract: 【Objective 】The objective of this study is to clone and analyze a novel cDNA, named as HeTubA, encoding the α-tubulin from Helicoverpa armigera (Hübner), and detect the relative expression levels of HeTubA and HeTubB by real time PCR (QRT-PCR). 【Method 】The total RNA was extracted from H. armigera 3rd instar larvae, and α-tubulin gene was cloned by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) and rapid amplification of cDNA ends (RACE). The relative expression levels of HeTubA and HeTubB were detected in different adult organs and developmental stages by Q