家蚕Bm595的表达、组织分布及亚细胞定位.pdfVIP

中国农业科学 2010,43(3):648-654 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2010.03.028 家蚕 Bm595 的表达、组织分布及亚细胞定位 王帅玉 1,2，盛 清 1,2，吕正兵 1,2，陈 健 1,2，聂作明 1,2，王 丹 1,2，刘立丽 1,2，沈红丹 1,2，舒建洪 1,2， 陈剑清 1,2 3 1,2 ，吴祥甫 ，张耀洲 1 2 3 （浙江理工大学生命科学学院生物化学所，杭州 310018 ； 浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室，杭州 310018 ； 中国科学院上海 生命科学院生物化学与细胞生物学研究所，上海 200031 ） 摘要：【目的】从家蚕蛹期 cDNA 文库中获得一条新基因Bm595，分析 Bm595 在家蚕体内的表达和定位情况。 【方法】利用生物信息学分析Bm595 序列，并构建重组表达质粒在大肠杆菌中诱导表达，以纯化的融合蛋白抗原， 制备多克隆抗体。用荧光定量PCR和Western blot方法分析 Bm595 基因在家蚕各组织中的分布。用免疫细胞化学 的方法研究 Bm595 蛋白的定位情况。【结果】 Bm595 在五龄幼虫的转录水平最高，卵中最低。Bm595 在家蚕五龄幼 虫各组织中的转录水平由高到低依次为：睾丸、丝腺、肠、头、卵巢、脂肪体、表皮、气管。在表达水平方面， 睾丸的表达量最高，其次是丝腺和头，脂肪体有较明显的表达。以家蚕 Bm5 细胞进行免疫细胞化学试验，Bm595 主要分布于细胞核内。【结论】在 mRNA、蛋白质表达和细胞水平对Bm595 进行初步表达分析和定位分析，为进一 步研究该蛋白在家蚕中的功能提供重要依据。 关键词：Bm595；组织分布；亚细胞定位 Expression, Tissue Distribution and Subcellular Localization of Bm595 from Silkworm (Bombyx mori) WANG Shuai-yu1,2, SHENG qing1,2, LÜ Zheng-bing1,2, CHEN Jian1,2, NIE Zuo-ming1,2, WANG Dan1,2, LIU 1,2 1,2 1,2 1,2 3 1,2 Li-li , SHEN Hong-dan , SHU Jian-hong , CHEN Jian-qing , WU Xiang-fu , ZHANG Yao-zhou 1 2 ( Institute of Biochemistry, College of Life Sciences, Zhejiang Sci-Tech University, Hangzhou 310018; Zhejiang Provincial Key Laboratory of Silkworm Bioreactor and Biomedicine,