家蚕hsp24.3基因的克隆及功能研究.pdfVIP

中国农业科学 2008,41(12):4201-4208 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2008.12.034 家蚕 hsp24.3基因的克隆及功能研究 1,2 1 1 1 1 刘彬斌 ，柴春利 ，王先燕 ，黄飞飞 ，鲁 成 1 2 （西南大学生物技术学院蚕学与系统生物研究所，重庆 400715 ； 四川农业科学院蚕业研究所，四川南充 637000 ） 摘要：【目的】对家蚕 hsp24.3基因（Bmhsp24.3）的功能进行研究，为选育抗逆境家蚕品种提供基础材料和 理论依据。【方法】在对家蚕基因组进行生物信息学分析的基础上，对家蚕低分子量热激蛋白基因 Bmhsp24.3 进 行克隆，然后利用家蚕的芯片数据对 Bmhsp24.3基因在5 龄第3天幼虫不同组织中的表达模式进行分析，并利用 半定量 RT-PCR技术，分别对 Bmhsp24.3基因在正常情况下和热刺激条件下家蚕5龄幼虫不同发育时期（1～6 d） 后部丝腺中的表达状况以及10个不同家蚕品种5龄第 3天幼虫丝腺中的表达情况进行了检测；最后将 Bmhsp24.3 基因进行原核表达，获得重组蛋白 rBmHSP24.3，并进一步对该重组蛋白的功能进行了体外验证。【结果】 Bmhsp24.3 基因的编码区（CDS）长度为 633 bp，编码 210 个氨基酸，为单外显子基因；RT-PCR 检测发现该基因在家蚕的体 壁、脂肪体以及丝腺组织中有较高水平表达，在其它组织中的表达不明显；同对照相比，不同家蚕品种以及不同 发育时期的5 龄幼虫在热刺激后，其后部丝腺中的 Bmhsp24.3基因的表达显著升高。经 Native和 SDS 分析表明，在高温条件下，表达获得的重组蛋白rBmHSP24.3能与硫氰酸酶形成稳定的复合物，使底物蛋白免受热 刺激胁迫而变性，从而起着分子伴侣的作用。【结论】重组蛋白 rBmHSP24.3在体外具有分子伴侣的功能，推测该 蛋白在家蚕体内同样具有分子伴侣的功能，在家蚕的抗逆境适应过程中起重要作用。 关键词：家蚕；低分子量热激蛋白（sHSP）；分子伴侣 Cloning and Functional Study of Bombyx mori hsp24.3 Gene 1,2 1 1 1 1 LIU Bin-bin , CHAI Chun-li , WANG Xian-yan , HUANG Fei-fei , LU Cheng 1 ( Institute of Sericulture and System Biology, College of Biotechnology, Southwest University, Chongqing 400716; 2Sericultural Research Institute, Sichuan Academy of Agricultu