基于微流控芯片电泳的番茄黄化曲叶病毒快速检测.pdfVIP

中国农业科学 2014,47(17):3405-3413 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2014.17.008 基于微流控芯片电泳的番茄黄化曲叶病毒快速检测 1,2 2 3 3 1,2 余明芬 ，曾洪梅 ，钟润涛 ，赵小明 ，邱德文 1 2 （新疆农业大学农学院，乌鲁木齐 830052； 中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室，北京 100081； 3 中国科学院大连化学物理研究所，辽宁大连 116023） 摘要：【目的】探索微流控芯片电泳方法在PCR 产物检测方面的效果，并建立针对番茄黄化曲叶病毒（Tomato yellow leaf curl virus，TYLCV ）的微流控芯片电泳检测方法，弥补琼脂糖凝胶电泳方法在试剂消耗、所用时间、 安全性方面的缺陷。【方法】通过对TYLCV 的基因组进行分析后，在该基因组中相对稳定的位置设计引物，同时兼 顾引用已被研究者研究过的引物，对这些选择的引物进行特异性、稳定性、灵敏度等方面的验证，筛选出用于后 续试验的引物。选择DNA 标准物φX174/BsuR I(Hae Ⅲ) marker，分别进行琼脂糖凝胶电泳和微流控芯片电泳， 对二者在耗材、耗时和灵敏度方面进行比较，确定微流控芯片电泳在核酸检测方面的应用价值。利用筛选出的其 中1 对引物对番茄叶片的实际样品进行PCR 扩增，随后通过微流控芯片电泳对其进行检测，以此探讨微流控芯片 电泳在病毒检测方面的检测效果。【结果】共筛选出 14 对TYLCV 备用引物，其中2 对引自文献，12 对为本文设计, 每对引物均可满足微流控芯片检测要求。选择其中 1 对引物TYLCV-T 作为随后的研究对象。利用琼脂糖凝胶电泳和 微流控芯片电泳对DNA 标准物检测，结果表明微流控芯片电泳在耗时方面不足琼脂糖凝胶电泳的1/10，约为13 min， 3 试剂消耗为琼脂糖凝胶电泳的1/8，检测灵敏度方面至少比琼脂糖凝胶电泳高10 倍，根据DNA 标准物原液浓度计 -6 -1 算可知，微流控芯片电泳至少可准确检测到浓度为5 ×10 μg∙μL 的核酸样品。利用微流控芯片电泳对TYLCV-T 扩 增的 TYLCV PCR 产物进行检测，将检测峰值图与 DNA 标准物的峰值图时间比较，就可判断出产物峰的大小范围。 【结论】筛选出的关于TYLCV 的备用引物可作为进一步研究微流控芯片技术在该病毒检测方面的基础；通过将琼 脂糖凝胶电泳和微流控芯片电泳进行比较，确立了后者在核酸检测方面的应用价值；通过微流控芯片电泳对TYLCV PCR 产物的检测，建立了基于微流控芯片电泳的TYLCV 快速检测方法，为TYLCV 的快速检测提供新的技术支持。 关键词：番茄黄化曲叶病毒；微流控芯片电泳；琼脂糖凝胶电泳；快速检测 Microfluidic Electrophoresis Detection of Tomato yellow leaf curl virus (TYLCV) 1,2 2 3 3 1,2 YU Ming-fen , ZEN