禽戊型肝炎病毒中国分离株ORF3蛋白的真核表达与抗原性分析.pdfVIP

中国农业科学 2012,45(11):2288-2294 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.11.019 禽戊型肝炎病毒中国分离株ORF3 蛋白的真核表达与抗原性分 析 1 2 1 1 2 胡守彬 ，赵 钦 ，赵菲菲 ，肖一红 ，周恩民 1 2 （山东农业大学动物科技学院预防兽医系免疫生物学实验室，山东泰安 271018 ； 西北农林科技大学兽医免疫学研究所/西北农林科技大学 动物医学院，陕西杨凌 712100 ） 摘要：【目的】为获得禽戊型肝炎病毒 （hepatitis E virus, HEV）中国分离株（CaHEV）ORF3 基因重组蛋白， 并对其抗原性进行分析。【方法】提取CaHEV 总RNA，通过RT-PCR 获得ORF3 基因，构建重组质粒pFastBac-HTB-ORF3， 转座DH10Bac 感受态细胞，提取重组杆粒Bacmid-ORF3，转染sf9 细胞，用SDS、IFA 和Western blot 对重 组蛋白表达进行鉴定。优化表达条件，将纯化的ORF3 蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体，用制备的多抗分别与截短表 达的3 段CaHEV ORF3 蛋白进行Western blot 和ELISA 检测，分析ORF3 蛋白的抗原表位区。【结果】SDS、 Western blot 和IFA 结果表明CaHEV ORF3 蛋白被成功表达且存在细胞内，昆虫细胞在接毒后4 天表达量最高。 4 将ORF3 重组蛋白免疫小鼠，利用间接ELISA 方法，对制备的多抗倍比稀释检测，效价达到10 ，Western blot 和 ELISA 分析表明ORF3 蛋白C 端74—88 氨基酸处具有较强的抗原性。【结论】本试验用Bac-to-bac 系统成功构建 含有CaHEV ORF3 基因的重组杆状病毒，并在昆虫细胞中得到表达，其主要抗原表位位于C 端74—88 氨基酸，为 进一步研究禽HEV ORF3 的蛋白结构和功能奠定了基础。 关键词：禽戊型肝炎病毒中国分离株；ORF3 蛋白；真核表达；抗原性 Eukaryotic Expression and Antigencity Analysis of Avian Hepatitis E Virus ORF3 Protein from China Isolate 1 2 1 1 2 HU Shou-bin , ZHAO Qin , ZHAO Fei-fei , XIAO Yi-hong , ZHOU En-min 1 ( Immunobiology Laboratory, College of Animal Science and Veterinary Medicine, Shandong Agricultural University, Taian 2 271018, Shandong ；Veterinary Immunology Research Institute of