项目三乳酸菌的筛选及应用要点.pptVIP

项目三 食品中益生菌的分离和鉴别任务一 酸乳中乳酸菌的的分离和鉴别 吴九玲 2012年10月 工作过程 乳酸菌的分类 乳酸菌的分离和鉴别 乳酸菌的应用 第一部分、乳酸菌的分类 指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌； (1)是一类可发酵利用碳水化合物而产生大量乳酸的细菌。 (2)大多数细菌都能产生或多或少的乳酸 ? 不能认为凡是产乳酸的细菌都是乳酸菌。 分为18个属，共有200多种； 大部分是人体内必不可少的且具有重要生理功能的菌群，其广泛存在于人体的肠道中。 二、乳酸菌的分类 按照Bersy细菌学手册中的生化分类法: 乳杆菌属(Lactobacillus) 链球菌属(Streptococeus) 含5个属 明串珠菌属(Leuconostoc) 双歧杆菌属(Bifidobacterium) 片球菌属(Pediococcus) 二、乳酸菌的分类 形态：细胞呈球形或卵圆形，成对或成链排列 运动性：一般不运动 营养类型：化能异养型 需氧情况：兼性厌氧型 形态：细胞球形或豆状，成 对或成链排列 运行性：不运动 营养类型：化能异养型 需氧情况：兼性厌氧型 形态：细胞呈多样形态：Y字形、 V字形、弯曲状、勺形，典 形形态为分叉杆菌 运行性：不运动 营养类型：化能异养型 需氧情况：专性厌氧 形态：细胞球形，成对或四联状 排列 运行性：不运动 营养类型：化能异养型 需氧情况：兼性厌氧 第二部分、乳酸菌的分离和鉴别 乳酸菌绝大多数都是厌氧菌或兼性厌氧的化能营养菌。生长繁殖于厌氧或微好氧、矿物质和有机营养物丰富的环境中。具体如下： （1）与动物相关分布：乳汁、消化道、粪便等； （2）与植物相关分布：花蜜、树液、植物残骸、果实损伤部位等； （3）发酵食品：泡菜、酱油、发酵肉制品等； （4）乳酸饮料：酸奶等。 （一）溶钙圈法 利用一些产酸类细菌在含CaCO3的培养基上产生CaCO3溶解圈，从而筛选出这些产酸类细菌，可用于乳酸菌的筛选。 其中培养基中加入CaCO3的作用是： ①鉴别能产生酸的细菌； ②中和产生的酸，以维持培养基的PH。 1、乳酸菌筛选培养基（MRS培养基） 配方（1L）: 蛋白胨 10.0g，牛肉膏 10.0g，酵母提取物 5.0g，K2HPO4 2.0g，柠檬酸三铵 2.0g，乙酸钠 5.0g，葡萄糖 20.0g，吐温80 1.0mL，MgSO4·7H2O 0.5g，MnSO4·4H2O 0.25g 备料单 培养基： MRS培养基100ml CaCO3乳浊液50ml 试管：4支（空） 生理盐水100ml 1ml刻度吸管 5支 平皿：3套 涂布棒1支 试管：4支（装培养基5-10ml） 高温灭菌 二人一组 样品预处理→梯度稀释至10-6→选择合适的稀释度涂布→37℃培养48h→挑选产生溶钙圈的菌落反复在MRS培养基上划线→挑起单菌落染色，经镜检确认为纯种→挑选革兰氏阳性单菌落→试管穿刺4℃冰箱保存。 4.鉴别 菌落挑选——斜面划线——纯化培养 染色、镜检 （二）溴甲酚绿指示剂法 （三）几种乳酸菌筛选举例 2、 保加利亚乳杆菌 样品来源：市售酸奶 培养基：牛肉浸膏 1.5％，酵母浸膏 0.5％，葡萄糖 3.0％，柠檬酸三铵 0.2％，七水硫酸镁 0.02％，琼脂 1.5％，pH 5.1。 培养温度：42℃ 需氧情况：兼性厌氧 筛选方法：常规的稀释涂布和划线分离法 样品来源：婴儿新鲜粪便、市售酸奶 培养基：MRS培养基、NPNL培养基 、TYP培养基、 PTYG培养基 培养温度：37℃ 需氧情况：严格厌氧 筛选方法：常规的稀释涂布和划线分离法 第三部分、乳酸菌的应用 一、乳酸菌的生理功能 二、乳酸菌的应用 （1）聚乳酸（PLA）简介 聚乳酸是以微生物发酵产物乳酸为单体用化学合成方法聚合而成的一种高分子材料，它无毒、无刺激性。 聚乳酸制品废弃后在土壤或水中，30天内会在微生物、水、酸和碱的作用下彻底分解成CO2和H2O，不会对环境产生污染，因而是一种完全可生物降解的材料。 目前聚乳酸的生产和制备主要有： （3）聚乳酸的应用 ①医用领域：如生产一次