仪器分析讲稿(液相)-要点.pptVIP

第三章 高效液相色谱分析（HPLC） §3.1高效液相色谱的特点 一、定义：液相色谱法是指流动相为液体的色谱技术。 二、特点 1.高压: 可达150～350×105 Pa 2.高速: 例，分离20种氨基酸，经典色谱法要20多小时， 用HPLC只需1小时. 3.高效：3万塔板/米（GC2000塔板/米） 4.高灵敏度： 紫外检测器10-9 g 荧光检测器10-11g §3.2影响色谱峰扩展及色谱分离的因素 一、与GC 比较65/1；基本概念及理论基础与GC一致； 主要区别：流动相为液体. 二、对色谱峰扩展及色谱分离影响的因素： 1.涡流扩散项 ： He = 2λdp 含义同GC法 2.纵向扩散项65/-1： Hd = CdDm/u； 在LC中可略,GC中重要； 3.传质阻力项：a.固定相传质阻力项； b.流动相传质阻力项. 结论66/-1；改进固定相就成为提高液相色谱柱效一 个重要问题. 综合分析，由于柱内色谱峰扩展所引起的塔板高度的变化可归纳为： H=A+B/u+Cu 3-6 形式与GC一致，其主要区别在于扩展项可以忽略，影响柱效的主要因素是传质项。67/1；-2. 从3-6式看出，H近似正比于d2p ， 所以67/2;9:减小粒度是提高柱效的最有效途径。 4.其它影响因素68/2； 柱外展宽：指色谱柱外各种因素引起的峰扩展. a.柱前展宽：主要由进样所引起； b.柱后展宽：主要由接管、检测器流通池体积所引起.为此，连接管的体积、检测器的死体积应尽可能小. §3.3高效液相色谱的主要类型及其分离原理 类型：液-液色谱；液-固色谱；离子交换色谱； 离子对色谱；离子色谱；空间排阻色谱 一.液-液分配色谱法及化合键合相色谱 1.特点：a.流动相和固定相都是液体 b.两相应互不相溶，有明显的分界面 2.分离机制：溶质在两相间进行分配 K = cs/cm = kVm/Vs 分离的顺序决定于分配系数的大小，分配系数大的组分保留值大.而且流动相的种类对分配系数有较大的影响. 3.分类： a.正相液-液色谱法：流动相的极性小于固定液的极性； b.反相液-液色谱法：流动相的极性大于固定液的极性； c.化学键合固定相：将各种不同有机基团通过化学反应共价键合到硅胶（担体）表面的游离羟基上，代替机械涂渍的液体固定相. 反相化学键合相色谱法已成为高效液相色谱法中应用最广泛的一个分支. 二.液-固色谱法（或液-固吸附色谱法） 1.特点：流动相为液体，固定相为吸附相。 2.分离机制 Xm + nSa = Xa + nSm K = [Xa][Sm]n / [Xm][Sa]n 3.结论69/-5： 显然，分配系数大的组分，吸附剂对它的吸附力强，保留值就大. 4.作用：a.适用分离相对分子质量中等油性试样。 b.对具有不同官能团的化合物和异构体有较高的选择性。 缺点：由于非线性等温吸附常引起峰的拖尾现象. 三.离子交换色谱法 1.分离机制70/2； 2.适用范围70/3；凡能在溶剂中电离的物质一般 均可用该法进行分离。 3.交换：KX = [- NR4+X-][Cl-] / [- NR4+Cl-][X-] DX =[- NR4+X-]/[X-]= KX[- NR4+Cl-]/[Cl-] 3-9 4.结论：a.分配系数D愈大，表示溶质的离子与离 子交换剂的相互作用愈强。 b.亲合力高的，在柱中保留值就愈大. 5.应用：a.分离离子或可离解的化合物。 b.已成功地分离氨基酸、核酸、蛋白质等. 四、离子对色谱法 1.特点：分离效能高，分析速度快，操作简便. 2.分离机制（P71） 3.分离过程：流动相中待分离有机离子与固定相或流动相中带相反电荷的对离子结合，形成离子对化合物，然后在两相间进行分配. X+水相 + Y－水相 ? X+Y－水相 KXY= [ X+Y－ ]有机相 / [ X+ ]水相· [ Y－ ]水相