PCR扩增检测乙肝病毒要点.pptVIP

实验三：PCR扩增检测乙肝病毒 乙肝病毒（HBV）感染引起的乙型肝炎，我国发病率很高 ，HBV的检测极其重要。 HBV DNA存在就可以引起乙肝的传染，乙肝病毒基因是乙肝病毒的核心成分，是病毒复制的发动机 。 PCR技术可以检测出极微量的病毒，是判断其传染性最直接、最可靠的证据。PCR技术已成为公认的对病毒性肝炎的诊断、疗效观察及预防研究工作最理想的方法之一。 一、实验目的 1.掌握PCR技术扩增的原理 2.熟悉PCR扩增检测乙肝病毒的基本操作过程。 二、实验原理 聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction) 简称PCR,是在体外条件下利用DNA聚合酶、催化一对引物间的特异性DNA片段合成的基因体外扩增技术，它包括三个基本过程： 三、主要器材及试剂 1.主要器材： 2.主要试剂： 四、操作步骤 1.标本处理：取患者血清40μl，加入DNA提取液40μl，沸水浴10分钟，10000转离心5分钟，取上清液4μl做PCR反应。 2.加样： 加入提取好的标本4μl，6000转离心10秒。 三个扩增步骤温度及时间 4.电泳检测： ①制备2%琼脂