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* * 第三节　透射电镜的性能与应用 一、透射电镜的性能 １.透射电镜是以电子束作为照明光源的 ２.装有聚光镜、物镜、中间镜、投影镜一系列电 　磁透镜 ３.其分辨率可达0.1~0.2nm ４.放大倍数可达100万左右 ５.电子散射的因素在其成像反差中起主导作用 ６.在放大500倍时焦点深度为500μm ７.图像用荧光屏显示，且无色彩 ８.适于1OOnm的超薄切片以及复型膜等 ９.要求样品在真空条件下成像 二、适用于透射电镜的样品 １.从样品的类别上分： 观察超薄切片 冷冻蚀刻的复型膜 悬浮样品的滴片 直接培养在载网上的·经过抽提处理的单层细胞 所以说透射电镜应用十分广泛 ２.从研究内容上分： 对细胞质膜或细胞质中的某些细胞器上的抗原 (或抗体)进行免疫标记 追踪细胞中某些大分子的放射自显影标记 对细胞申的某些生化成分作定位、定性、甚至定量的研究 制备细胞内微区元素定性和定量分析的样品 　　一般需先制备超薄切片，再分别做特殊的处理，所以这类样品都可用透射电镜来观察 专门研究细胞的超微结构，如:研究细胞质膜、细胞内膜系统中的某种细胞器或中心粒和细胞连接装置等，就更需用透射电镜了 透射电镜的操作程序 （１）接通高压开关 （２）加灯丝电流 （３）电子枪的对中（和轴） １.开机（启动） ２.电子束的获得与对中 ３.照明系统的调节 （１）聚光镜和轴 （２）聚光镜光阑的选择与对中 （３）聚光镜消像散 ４.成像系统调节 （１）物镜电子束移动补偿 （２）物镜和轴的调整 （３）中间镜、投影镜的调整 （４）物镜像散校正 ５.像观察和记录 （１）低倍下检查样品 （２）正常观察 （３）像记录 ６.停机 三、透射电镜的操作程序 １.开机（启动） 　　　启动的目的在于开动真空泵、接通各种电源，使其预热并达到稳定状态；预抽镜筒，直到镜筒各部分达到高真空状态。 （１）合上总电源开关，使仪器与总电源接通。 （２）打开冷却水阀门(或循环水电源)。 （３）检查各开关，旋钮是否在正确位置，然后打开仪器启动开关，这时仪器逐级抽低真空和高真空，直到完成10-５Torr 以上的真空度。准备 (操作)灯亮。共计约30~40分钟。 ２.电子束的获得与对中 （１）接通高压开关 在选择高压时，灯丝控制钮必须关闭或在最低位置，这样可以防止由于突然产生电压脉冲而引起灯丝或样品损坏，按下高压钮后要注意观察束流表，由于电子枪内有脏物会发生微放电或电晕现象，放电时会释放出镜筒吸附的残余气体，所以束流表会大幅度摆动，这个过程叫电子枪自清洁。选择电压值愈高，电子枪自清洁和达到稳定所需要的时间愈长。一般选择高压时，要选用比所用高压更高一档的电压值，用这一档使电子枪自清洁，然后再回到所需用的高压一档，这样电子枪能得到很好时稳定，只有在完全稳定以后才能进行下步操作。 （２）加灯丝电流 在高压稳定以后，开始加灯丝电流，慢慢增加灯丝电压，一开始束流表几乎不动，当开始发射时，束流表指示上升很快，直到荧光屏上亮度和束流达到最大时，再增加灯丝电压束流也不增加为止。这个位置即是灯丝的饱和点。注意缓慢转动旋钮，切不可将灯丝电压加得过高，否则将会大大缩短灯丝寿命。 （３）电子枪的对中（和轴） 当慢慢增加束流时，荧光屏反而变暗，这时就要调节电子枪合轴钮，使荧光屏亮度增加到最大。再增大束流若再变暗则再调整电子枪倾斜合轴钮，直至亮度最大为止。 每次接通电子枪,改变高压或更换样品,或其他原因关去灯丝重新加热时，都要重新检查调整灯丝饱和点，以保证灯丝寿命。 ３.照明系统的调节 （１）聚光镜和轴 　　目的是为了使聚光镜光轴与电子枪发射的电子束合轴。当聚光镜会聚的光斑与光轴偏离时，在荧光屏上会造成照明明显不均匀，因此需要合抽。合轴的方法是改变光斑尺寸，即调节第一聚光镜电流。同时用第二聚光镜聚焦。若发现原来已对中好的光斑偏离屏中心，就是由于聚光镜与电子枪对中不好，可用机械装置或电控制的合轴线圈对中。此操作反复进行直至光斑不偏离中心为止。 （２）聚光镜光阑的选择与对中 　　第二聚光镜中设有一多孔的活动光阑，根据需要选择恰当的光阑孔，以改变照明角。一般厚的样品选用大孔，需要反差大的薄样品、易被电子束损伤的样品选用小孔。通常用３００～５００μm光阑。光阑插入后要进行光阑孔与透镜对中合轴，改变第二聚光镜电流，在焦点两边。光斑应在屏中心均匀地伸缩，若偏心变动应调整光阑X、Y/方向的调节钮进行校正． （３）聚光镜消像散 　　在双聚光镜系统中第一聚光镜是一个弱透镜，像散较大。当第二聚光镜聚焦时，在焦点前后光斑呈椭圆形变化，这就是聚光镜像散，它会减弱照明束亮度，并使成像不均匀。聚光镜消像散一般用消像散器调节，方法有三种： 　　a.使聚焦光斑变圆：即调节第二聚光镜电流，在焦点前后