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口蹄疫病毒oh9株细胞传代毒全基因组序列测定及其感染性克隆的构建
口蹄疫病毒OH／99株细胞传代毒
全基因组序列测定及其感染性克隆的构建
摘要
口蹄疫(Foot．and-Mouth
流行严重危害畜牧业的持续健康发展，因此，世界各国非常重视对该病的研究。
本研究根据FMDV的基因组核苷酸序列设计并合成了数对反转录。聚合酶
代毒中扩增得到一7300bp片段，同时，采用常规RT-PCR技术扩增得到其5’．
非翻译区(5-untranslated
region，5-UTR)的S片段和内部核糖体进入位点序
ribosome
列(internal entry
序列测定。应用连接PCR的方法将i5bp
poly(C)序列插入s和IRES两片段
Easy
之间，并将连接片段插入pBlueseriptSK，然后将7300bp片段从pOEM-T
SK中，构建了OH／99株全长eDNA。
载体上切下，插入重组体pBluescript
以全长eDNA重组质粒为模板进行全长PCR扩增，PCR产物经Ndel消
化后，利用噬菌体T7启动子聚合酶系统启始合成RNA转录本，借助脂质体
将RNA转录本转染BHK．21细胞。转染细胞连续传3代后出现典型的细胞病
变，通过RT-PCR和电子显微镜观察均确证了感染性病毒粒子的产生。将此基
因工程毒接种乳鼠后出现了典型的临床症状，进一步说明了FMDV01-I／99株
感染性克隆构建成功。
本研究为FMDV基因组结构和功能的研究奠定了良好的基础，也为新型
疫苗的研究提供了非常有用的工具。
关键词：口蹄疫病毒；全长感染性eDNA克鹰：基因组
anInfectious
Genomic andConstructionof
Complete Sequencing
of Strain
eDNACloneaCell FMDVOH／99 Isolated
Passaged
fromInfectedSwine
ABSTRACT
Foot-and—MotithDiseasefFMD)isoneofthemost diseaseol
importam
cloven-hoofedanimals．It jnfluence oftheanimal and
seriously development husbandry
causeconsiderableeconomicJOSS．Therefore．alJthecountriesoftheworldmuch
pay
toits and
attention
studyprevention．
Inthis of were for the of
pairsprimersdesigne genome
paper，several sequencing
the ofOH／99 obtained
FMDV0H／99strain．
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