小鼠大脑组织雄特异性基因cdna文库的构建及研究.pdfVIP

小鼠大脑组织雄性特异性基因cDNA文库的构建及研究 摘 要 雄性特异性抗原(脚Ie-specjfic antig锄)通常也称为雄性特异性弱组织相容 性Y抗原(male—specific 织移植的排斥反应、性别分化及性别控制方面的研究中具有重要的理论和实践意 义。 本研究采用高度近交的纯系BAL～c小鼠作为动物模型，利用抑制性差减 subtractive 杂交技术(suppressionhyMdizaion)，构建小鼠大脑组织雄性特异性 抗原的cDNA文库，首次从雄性和雌性哺乳动物基因差异表达的角度来研究雄 性特异性抗原。实验分别提取雄性和雌性BAL刖C小鼠大脑组织总RNA，纯化 出mRNA。以雄性小鼠为Tester组，以雌性小鼠为D晰er组，利用抑制性差减 杂交技术得到小鼠大脑组织雄性特异性基因cDNA。将cDNA与pGEM．T载体 连接转化大肠杆菌JMl09，构建抑制性差减cDNA文库。从构建的cDNA文库 中随机挑取160个克隆，对其进行PCR扩增进行鉴定，共获得134个阳性克隆， 阳性率为83．7％，对阳性克隆以T7和sP6为引物进行PCR扩增，显示插入的片