尖吻蝮蛇类凝血基因的克隆和表达研究.pdfVIP

中文摘要 蛇毒含有多种影响凝血系统的生物活性成分，其中大部分是酶和多肽。为了获得蛇毒类 凝血酶，本研究根据不同蛇毒类凝血酶cDNA5’和3’保守性序列设计了引物：通过逆转录 一聚合酶链式反应(RT—PCR)方法从尖吻蝮蛇毒腺总RNA中扩增得到特异性蛇毒类凝血酶 (TLE)基因，与原核表达载体pMAL—p2X连接构建融合表达载体，获得重组质粒pMAL-TLE。 脂柱纯化，阁Factor Xa切割，得到分子量约30Kd的重组目的蛋白。 对表达蛋白和重组TLE蛋白进行免疫印迹检测分析，结果均为阳性。重组蛇毒类凝血酶 能够被抗蝮蛇蛇毒血清抗体所识别，说明重组蛇毒类凝血酶具有一定的生物活性。同时本实 验对载体的构建、蛋白的表达和纯化等各个步骤的条件进行了实验优化，得到了良好的结果。 关键词：蛇毒类凝血酶基因， 重组质粒载体pMAL-TLE，表达，纯化 ABSTRACT vailOUS and Thevenorrlsof andCrotalidaesnakescontain