携带ibv基因组质粒的大肠杆菌发酵及提取工艺研究.pdfVIP

摘 要 本研究以本课题组构建的携带禽传染性支气管炎病毒真核表达质粒(pcDNA-S1、 pcDNA-M、pcDNA—N)的重组大肠杆菌为研究对象，对其发酵工艺进行了研究。 采用单因子分析和正交设计，对重组大肠杆菌的摇瓶发酵工艺进行了研究，优化 了装液量、培养温度、初始pH等培养条件，摇瓶发酵后，以碱裂解法提取质粒产量 可达46．5mg／L，是未优化前质粒产量的6．8倍。 研究了携带禽传染性支气管炎病毒真核表达质粒基因工程菌在20L发酵罐中的 发酵工艺。进行了分批发酵和补料发酵。结果表明，补料发酵在菌体量和质粒产量上 均有增加。通过补料发酵，每小时补加80ml补料培养基，菌体密度(OD600)可达到 mg／L。所得质粒产量是分批发酵产量的1．6倍。 43，以碱裂解法提取质粒产量达到76 与LB培养基相比，菌体浓度和质粒产量分别提高了40倍和27倍。 对发酵液用热激法和碱裂解法两种不同的提取方法进行粗提，再用聚乙二醇和硅 藻土两种方法进行纯化，并对纯化条件进行了优化，建立了以碱裂解法粗提，硅藻土 法纯化的质粒DNA提纯工艺。该工艺可去除大部分RNA、基因组DNA和蛋白质等杂质， 提取的质粒DNA纯度可达到1