毕赤酵母表达猪干扰素及其抗病毒生物学活性的研究.pdfVIP

中 文摘要 为了在我国研制生物工程重组猪干扰素类制剂，防制猪病毒性传染塑和进一步 pastoris)表达 开展猪干扰素的分子生物学研究，本研究率先利用毕赤酵母(Pichia 系统对猪丫．干扰素进行了表达。f根据我们已克隆的猪T．干扰素(PolFN-yx)基因序列， 在其成熟肽和终止密码子序列问分别设计了含EcoRl和BamHl酶t：JJ位点的一对引物， 分泌信号肽之后，转化大肠杆菌JMl09感受态细胞，用含氨苄青霉素(Amp)的LB 平板筛选阳性克隆，并对重组菌进行PCR鉴定、EcoRI和BamHl双酶切鉴定以及 序列测定。在大肠杆菌中成功构建了重组表达质粒pHIL．S1／PolFN-T2。随后用电激 择性培养基基本甲醇培养基(MinimalMethanol，MM)和基本葡萄糖培养基(Minimal Mots)。为了挑选高 Dextrose，MD)在30(2培养2天后筛选阳性酵母重组菌(HisV