大叶藻(zosera marina l.)愈伤组织体系的建立及优化.pdfVIP

摘要 本论文以海洋盐生被子植物大叶藻为研究对象，以组织培养技术原理为指 导，以大叶藻初生分生组织和器官为外植体，探究培养基种类、培养基添加物、 培养方式、培养条件等对大叶藻不同外植体诱导愈伤组织的影响，探讨大叶藻愈 伤组织诱导的优化条件，为通过大叶藻愈伤组织诱导体细胞胚间接发生和植株再 生提供充足的种质来源，为人工条件下实现大叶藻规模化组织培养快繁体系做基 础技术参考；实验结果如下： 1．以大叶藻初生分生组织为外植体诱导愈伤组织 (1)无菌苗的培育及培育条件的优化 本实验研究培养基盐度(5‰、10‰、．15‰、20‰、25‰和30％o)、培养温度 Lx、500Lx、1000Lx、 (10℃、14℃、18℃、22℃和26℃)和培养光照强度(0 2000 Lx和4000 LX)对大叶藻种子萌发的影响，为组织培养提供充足的无菌外植 体来源。 优化实验结果表明，培养液为低盐时(盐度为5‰一10‰)时，有利于大叶藻种 子在短时间萌发；而温度为14℃时，种子的萌发率明显高于其他温度下的萌发 率；光照强度对大叶藻种子萌发率影响不明显，高光强(4000LX)不利于种子萌发。 Lx 综上所示：培养液盐度为5％o．10‰，在温度为14℃光强为500Lx．1000 时可以为组织培养提供充足的无菌外植体供应。 (2)以无菌苗为外植体进行愈伤组织的诱导 ①培养基种类、培养方式对不同部位的外植体愈伤组织诱导的影响 体培养、半固体培养和液体培养)对不同部位的外植体(胚根、胚轴和叶)愈伤组织 诱导的影响，为大叶藻无菌苗愈伤组织诱导提供基础的理论指导。 伤组织的诱导，只有液体N6可以促进无菌苗的胚根形成少量浑浊的浅绿色丝状 物，染色后发现绿色物质中含有大量细菌或真菌和少量染色浅的空泡状细胞；而 五种固体培养基均可以促进无菌苗形成愈伤组织。其中，MS、N6和Sea培养基 不利于愈伤组织的形成，愈伤组织诱导率低且含有大量的细菌或真菌：而VSE 和PESI培养基有利于无菌苗的胚根形成愈伤组织，组织中含有少量的细胞和极 少量的细菌，而叶和胚轴形成的愈伤组织中含有极少量的细胞。 综上所述：无菌苗的胚根可以在添加激素和碳源的固体VSE培养基上形成 高诱导率的愈伤组织，组织中含有少量的细胞和极少量的细菌。 ②培养基添加物对大叶藻愈伤组织诱导的影响 本实验研究植物生长调节剂的种类(生长素2，4．D、NAA和lAA与细胞分裂 素6．BA和KT配比)，植物生长调节剂的浓度(不同浓度的2，4．D和6．BA)，碳源 种类(蔗糖、葡萄糖、甘露醇和甘油)、碳源浓度(10g／L、20g几、30∥L、40g／L 伤组织形成的影响，以提高愈伤组织的诱导率和愈伤组织的质量。 实验结果表明：vSE培养基中添加2，4．D和6．BA有利于大叶藻无菌苗愈伤 组织的诱导，激素浓度对愈伤组织的诱导影响不显著；蔗糖，甘露醇和甘油均有 利于大叶藻愈伤组织的诱导，诱导率差异不显著，但是蔗糖有利于外植体形成具 有大量染色深细胞的绿色愈伤组织：蔗糖的浓度对大叶藻愈伤组织的形成影响差 异不显著，但蔗糖浓度过高(40g／L一50∥L)时，愈伤组织干瘪无光泽；培养基中 添加0．4％．1．3％的琼脂均有利于大叶藻愈伤组织的形成，含量为0．7％时愈伤组 织诱导率最高(93．33％)，琼脂含量过高(1．0％一1．3％)时愈伤组织干瘪无光泽。 的琼脂有利于形成高诱导率的愈伤组织，且愈伤组织中含有大量染色深的细胞和 极少量的细菌。 ③培养条件对大叶藻愈伤组织诱导的影响 0℃、1 Lx、 本实验研究培养温度(1 5℃、20℃、25℃和30℃)和光照强度(500 1 Lx、4000 000Lx、2000Lx和80Q0Lx)对大叶藻愈伤组织形成的影响，以提高 愈伤组织的诱导率和愈伤组织的质量。 实验结果表明：培养温度为10℃一30℃时均可以诱导无菌苗的胚根形成愈伤 组织，当温度为20℃时，愈伤组织的诱导率最高，为80％，与其他