抗wssv-v37结合蛋白单克隆抗体的研制及其初步应用.pdfVIP

抗WSSV—VP37结合蛋白单克隆抗体的研制及其初步应用 抗WSSV．VP37结合蛋白单克隆抗体的研制及其初步应用 摘要 白斑症病毒(WSSV)病是危害对虾养殖业健康发展的主要疾病之一，自1993 年暴发以来，国内外学者纷纷对其开展研究。由于病毒粘附蛋白与宿主细胞受体 的结合是病毒感染的起始与关键环节，因此，从分子水平上研究WSSV的粘附 蛋白及其在宿主细胞表面的结合蛋白，对于弄清WSSV感染机理、探索防治途 径具有关键意义。VP37是WSSV的主要囊膜蛋白之一，据报道其抗体具有病毒 中和效果，它可能是WSSV一个重要的粘附蛋白。本论文对VP37进行了原核重 用纯化的VP37结合蛋白免疫小鼠，制备了抗VP37结合蛋白的单克隆抗体；研 究了该单抗与不同对虾鳃组织的免疫反应，并利用该单抗开展了WSSV与宿主 细胞体外结合的阻断研究。具体研究内容与结果如下： (1)VP37结合蛋白的提纯与鉴定。本实验扩增了VP37编码基因，全长843 bp，构建了融合表达载体PET32a．VP37，转入大肠杆菌后成功表达，获得分子 量为52kDa的rVP37蛋白。利用差速离心法提取了凡纳滨对虾的鳃细胞膜蛋白， 能与凡纳滨对虾鳃细胞膜上l条分子量为53kDa的蛋白带结合。经切胶、电泳 洗脱纯化该目的蛋白，质谱鉴定其为13-FIATPase。 (2)抗VP37结合蛋白单克隆抗体的研制。将纯化的VP37结合蛋白为抗原， 的阳性杂交瘤，并采用有限稀释法克隆获得了6株稳定分泌抗VP37结合蛋白的 抗均能与凡纳滨对虾鳃组织发生特异性的荧光反应；Western-blot显示各株单抗 kDa左右的蛋白发生特异性结合。抗 均能与凡纳滨对虾鳃细胞膜上分子量为53 IgM亚型。 抗WSSV-VP37结合蛋白单克隆抗体的研制及其初步应用 (3)抗VP37结合蛋白单克隆抗体的初步应用。通过IIFA检测单抗与中国 对虾、斑节对虾和日本对虾的鳃组织的免疫反应，发现抗凡纳滨对虾鳃细胞膜上 VP37结合蛋白单抗均能与这三种对虾的鳃组织发生交叉反应，说明这些WSSV 易感对虾的鳃细胞上存在着与凡纳滨对虾鳃细胞膜上VP37结合蛋白相同的抗原 表位。进而，利用该抗体开展了WSSV与凡纳滨对虾鳃细胞膜体外结合的阻断 凡纳滨对虾的过程中起重要作用。 关键词：白斑症病毒； VP37结合蛋白；单克隆抗体；凡纳滨对虾；鳃细胞膜 Productionand ofmonoclonal Preliminaryapplication — seidoantibodiesbitna73PV．V～S—InotWSSVVP37 againstgl bindingbindingproteinprotein Abstract White the most viral that spotsyndromevirus(wssv)isimportantpathogen causesconsiderableeconomicto culture itoutbrokein damageshrimp industry．Since hasbeenstudiedscholarsathomeandabroad．Astheinteractionofviral 1993，it by attachmentandthehostcell istheinitiativeandcriticalofviral proteins recep