酶的改造方法进展讲解.pptVIP

抗体酶的发展前景 抗体酶已成为研究酶的作用机制的一个有力的工具。抗体酶的研究过程中，可以直接观察到过渡态理论对抗体酶设计所起到的重要作用。这也就为酶的过渡理论的正确性提供了一个有力的实验证据。 抗体酶在有机合成和有机反应机制研究方面，也引起了有机化学家的广泛兴趣。抗体酶使过去很多不能应用酶促反应的有机合成得以实现。 酶人工模拟的发展趋势 人工模拟方法较多，但进展不平衡 环糊精模拟发展最早，杂合方法是新趋势； 抗体酶是发展最快的模拟方法 抗体酶制备技术成熟，应用渐入佳境，值得重视！ 人工模拟的机理研究有待深入 10. 磁性材料在酶固定化中的应用 11、定向共价固定化酶的研究进展 12、介孔材料在酶固定化中的应用 13、纳米材料在酶固定化中的应用 14、大孔聚合物在酶固定化中的应用 15、微囊化技术在酶/细胞固定化中的应用 47、固体表面的酶固定研究进展 49、金属氧化物在酶固定化领域中的应用 讨论题安排（10.21和10.28） 9、抗体酶在生物催化领域的应用;（2人） 51、定向进化在提高脂肪酶手性选择性中的应用 52、定向进化在提高酯酶耐热性中的应用 53、基于可见/紫外吸收技术的高通量筛选方法 54、基于荧光技术的高通量筛选方法 48、菊粉酶的定向进化研究 50、酵母细胞表面展示技术在高通量筛选中的应用 讨论题安排（11.4和11.11） * 酶是由蛋白质组成的。它对热，酸，碱以及有机溶剂不稳定。限制了其在工业中的应用。 固定化酶-----指被结合到特定的支持物上并能发挥作用的一类酶。是化学酶工 程中具有强大生命力的主干。 模 拟 酶-----模拟酶的生物催化功能，用化学半合成法或化学全合成法合成的酶称模拟酶。 易错PCR方法 有性进化：DNA改组方法（1994，Stemmer) 有性进化：体外随机重组法（1998，Arnold) 有性进化:交错延伸法（1997，Arnold) 基因家族的同源重组 无性进化方法：易错PCR法，盒式诱变 有性进化方法 1）DNA改组法（DNA Shuffling) 2）体外随机重组法（RPR) 3）交错延伸法(StEP) 基因家族的同源重组 外显子的改组 杂合进化 基因突变库的筛选方法 目标 根据定向进化要求，在一定的环境要求下进行筛选，从突变基因文库中得到所需的突变基因。 难点 突变库容量大，一般达到106，工作量巨大 关键 高通量筛选：通量大，效率高 方法 平板筛选法，荧光筛选法，噬菌体表面展示法，细胞表面展示法 平板筛选方法 依据细胞生长情况筛选 热稳定性：温度梯度和高温环境 抗生素耐受性：抗生素浓度梯度 pH稳定性： pH梯度 极端环境：高盐、低温、高浓毒物质 平板筛选方法 依据颜色变化筛选 大肠杆菌?-半乳糖苷酶基因显色：噬菌体DNA载体（蓝色） 反应产物显色：磷酸酯酶水解硝基酚磷酸生成黄色硝基酚 脂肪酶筛选 海因酶筛选 平板筛选方法 依据透明圈大小筛选 淀粉酶的进化：淀粉平板培养基 豆鼓纤溶酶的进化：血纤维蛋白培养基 荧光筛选方法 利用自身荧光激发特性 生成产物本身是具有荧光激发特性的物质 利用荧光报告基因 辣根过氧化合物酶和单加氧酶的融合基因： 原理：萘→萘酚→醌类化合物（能激发荧光） 绿色荧光蛋白基因：获2008年诺贝尔化学奖 绿色荧光蛋白的应用 分子标记： FISH分析菌株 （a）未加探针；（b）DAPI染色（c）α-探针杂交（d）Msint-1268探针杂交菌株Y1；（e）Msint-1268探针杂交M. trichosporium OB3b 噬菌体显示筛选模式 噬菌体显示的几种类型 核糖体显示技术 RNA-蛋白质融合技术 RNA-蛋白质的融合 酶定向进化的发展趋势 定向进化方法发展迅猛 方法均有知识产权；方法更有针对性和特征性； 高通量筛选方法是关键 新方法（荧光显示/表面展示）在涌现，技术交叉是趋势； 定向进化是近20年中最成功的酶改造方法 新的实例越来越多； 酶对热，酸，碱以及有机溶剂的不稳定性，限制了其在工业中的应用。 四、酶的人工模拟 模 拟 酶 ----- 模拟酶的生物催化功能，用化学半合成法或化学全合成法合成的酶。 固 定 化 酶 ----- 结合到特定的支持物上并能发挥作用的一类酶。 根据酶的作用原理来模拟酶的活性中心和催化机制，用化学方法制成的高效、高选择性、结构较简单、稳定性较高的新型催化剂。 模拟酶 利用现有的酶或蛋白质做母体，引入相应的催化机团，形成酶的化学修饰物。 以合成的高分子聚合物为母体，根据酶的活性部位结构，连接上所需的功能机团或金属配合物。 主客体酶模型：环糊精、冠醚