从卵巢癌cdn文库筛选新的肿瘤标志物.pdf

苎至 圭塑墨三曼登盔兰堡主!!!!一 中文摘要 肿瘤免疫学的核心问题之一是肿瘤特异性抗原的寻找。利用SEREX技术， 以肿瘤患者自体血清筛选肿瘤细胞eDNA表达文库获得肿瘤特异性抗原。是肿 瘤免疫学研究中的新策略，应用该方法寻找和获得的肿瘤排斥抗原或相关抗原， 一方面可为选择特异性肿瘤抗原用于肿瘤的临床诊断和免疫治疗提供理论依 据；另一方面有利于从理论上探讨机体对肿瘤抗原的体液免疫应答机制，以及 抗体识别的抗原表位和CTL识别的抗原表位之间的关系。 本论文采用SEREX的方法筛选了自行构建的中国人卵巢癌cDNA表达文 库，对所得到的阳性克隆进行分析鉴定。通过3轮免疫学筛选，我们得到了27 个阳性克隆，对其进行序列分析和同源性比对，初步了解了阳性克隆的性质， OVA．13三个阳性基因，利用基因工程的方法克隆其全长基因，并经过测序鉴定， 选取pET．32a作为表达载体，构建得到相应的表达质粒，在大肠杆菌中成功表 达6XHis融合蛋白：采用亲和层析和蛋白酶处理的方法得到纯度90％以上的蛋 高效性。分别采用Dot．blot和ELISA的方法检测了三个目的蛋白抗原在正常人 和肿瘤患者中的血清学反应格局。