东方田鼠天然抗本血吸虫感染机理的探讨.pdf

串南大学醺l：学位论j更 东方田鼠天然抗日本血吸虫感染机理的探讨 摘 要 枣方田鼹是日本血吸虫的非适宜宿主·早在60年代我国学者就已证实日本血吸 虫童虫在东方用鼠体内缓慢生长，并于感染后3～4周逐渐降解。抗体检测实验表明 东方田鼠血清可能存在抗日本血吸虫的天然抗体，本文对东方田鼠天然抗日本血吸虫 感染的机理进行了初步探讨，并利用东方田鼠这一模型进行新抗原分子及模拟表位的 筛选，以期获褥抗日本血吸虫的新型疫苗分子或表位。 一，东方田鼠血清及其不同部分对日本血吸虫童虫的体外杀伤作用j 通过观察东方田鼠血清及其补体、血清蛋白及小分子部分对童虫的杀伤作用， 对东方田鼠血清体外杀伤的可能机制进行初步探讨。(将血清分成两部分，并分别观察 了东方田鼠全血清、去补体血清、蛋白及小分子血清部分对体外培养童虫的杀伤。此 外，还观察了蜕皮素对东方田鼠血清杀伤作用的影响。结果表明东方用鼠热灭活去补 体血清对童虫的杀伤显著低于未去补体正常血清，提示补体在东方田鼠血清杀伤机制 中有重要作用；感染及正常东方田鼠血清小分子在第48及72小时表现出一定杀伤作 用(30％)，而血清蛋白在24小时就有显著杀伤，但杀伤作用略低于全血清，说明 血清蛋白为体外杀伤的主要成分，可能与小分子部分协同参与杀伤；蜕皮素对东方田 、 鼠血清培养的童虫无明显影响A 二、从随机多肽库中筛选日本血吸虫抗原模拟表位诱导保护性免疫的 ■ ．，．研究； V ’ 分剐用正常及感染日本血吸虫的东方田鼠赢清筛选在丝状噬菌体袭面表达的随机 十二肚库·咚三轮亲和筛选后，随机挑取噬菌体克隆，ELIs^检测其与日本血吸虫抗 血清的反应．用筛选出的混合噬菌体免疫小鼠并进行攻击感染。髓机挑取的各12个 克隆中．感染东方田鼠血清来源的噬菌体有10个克隆为阳性，正常血清来源的噬蓖 t 一一————————————————————一—————一……一 串南丸辛骥l：学位诧殳 体有7个克隆为阳性。用感染东方田鼠血清筛到的噬菌体免疫小鼠诱导了部分保护 效果(22．6％)及较高的肝卵减少率(68．9％)。而正常东方田鼠血清筛到的噬菌体 没有保护效果。 结果表明感染东方田鼠血清筛到的模拟表位具有一定的免疫原性， 提示随机肚库技术在日本血吸虫疫苗研制中有其潜在价值。吝 三、东方田鼠感染血清及正常血清对日本血吸虫成虫表达文库的免疫筛 -_—一—_——_●_一 选。 为探讨东方田鼠对日本血吸虫感染天然抗性的分子机制，寻找可能的保护性疫 苗候选分子，我们用感染及正常东方田鼠血清筛选日本血吸虫成虫表达文库。恤三轮 筛选，感染衷方田鼠血清共筛得98个阳性克隆，而正常血清未筛到阳性克隆。将阳 性克隆用辅助噬菌体剪切并PCR扩增，对其中四个克隆进行涮序。同源序列比较分 析显示第24号克隆与日本血吸虫动力蛋白轻链同源．其余三个克隆均为新基因，分 MF7的序列进行 MF25，并均已登陆Cjenbank。对sj MF3、sjMF7及sj 别命名为sj 分析及二级结构预测显示MF7编码的蛋白可能是分子量为10-kDa的可溶蛋白，定位 于胞核或微体，具体功能还不清楚。这些抗原分子的免疫保护作用还有待进一步研 究。孓 ， 2