两株抗人cd4配体单克隆抗体的制备及其生物学功能研究.pdfVIP

两株抗人CD40配体单克隆抗体的制备 及其生物学功能研究 研究生：樊一笋 导师：张学光 摘 要 的II型跨膜糖蛋白，其基因定位于Xq26．3一Xq27．1，属于肿瘤坏死因 子(TNF)超家族，主要表达在活化的CD4+T细胞和肥大细胞表面。 答中的作用。HIGM免疫缺陷病发病机制为编码CD40L的基因发生 主要表现为血清IgM的水平升高，IgG、IgA、I班水平下降或完全 缺失。越来越多的研究表明，CD40／CD40L在特异性免疫应答中发 胞的有效活化，进而介导其分化、成熟，启动免疫应答的产生；(2) 活化T淋巴细胞，介导细胞免疫应答，参与记忆性T淋巴细胞的形 成；(3)促使B细胞的活化、增殖、分化、分泌Ig及类型转换，对 生发中心和记忆性B细胞的形成及维持起重要作用；(4)促进免疫 摘 要 免疫应答的调节。 效地抑制特异性免疫应答，减少特异性抗体和CTL的产生，在自身 免疫、移植排斥、炎症等病理免疫反应中发挥重要作用。有报道， 抗CD40L单克隆抗体在小鼠自发性。肾炎SNFl、小鼠糖尿病NOD、 实验诱导的胶原性关节炎、实验性自身免疫性脑脊髓炎EAE等自身 免疫病模型中，均能不同程度地减少自身抗体或自身反应性T细胞 的产生，缓解症状，延迟病程发展。同时，在皮肤、心脏、肾等小 鼠移植模型中，运用抗CD40L单克隆抗体能明显延长移植物的存活， 为移植排斥的防止和移植耐受的诱导提供了新方法。该单抗在基础 及临床免疫学中的应用前景已受到广泛关注。目前，世界上报道的 阻断型抗CD40L单抗仅三株，国内尚未见有关报道。鉴此，阻断型 抗CD40L单抗的研制不仅具有重要理论研究意义，而且还有潜在的 、 开发价值。，p 本研究以高表达人CD40L分子的小鼠成纤维转基因细胞为抗原， 采用B淋巴细胞杂交瘤技术将免疫的小鼠脾脏细胞与小鼠骨髓瘤细 胞SP2／0融合，通过荧光标记、竞争抑制、细胞核型分析和免疫印迹 等方发获得并建立两株识别不同抗原位点的鼠抗人CD40L单克隆抗 体的杂交瘤细胞株，分别命名为181、4F1。经体外长期传代培养， 液氮冻存半年以上反复复苏良好，分泌特异性抗体性能稳定。 f CD40分子表达在一些非免疫细胞如血管内皮细胞、胸腺内皮细 胞，以及一些淋巴细胞性肿瘤病：卵巢癌、鼻咽癌、膀胱癌、慢性 淋巴细胞白血病(CLL)、非何杰金氏淋巴瘤(N甩)、幼淋巴性白 血病(PLL)及多发性骨髓瘤(MM)等。文献报道，这些肿瘤细胞 与正常的免疫细胞不同，用抗CD40激发型单抗激发或CD40L转基 因细胞与表达CD40分子的肿瘤细胞相互作用，可导致其生长抑制甚 摘 要 4FlmAb对CD40／CD40L信号的阻断效应。 混合淋巴细胞反应(MLR)是源于两个不同个体的淋巴细胞在体外 混合培养时，由于细胞表面HLA．II类抗原中的D和DP抗原不同以及 共刺激分子的相互作用，激发导致淋巴细胞转换，并产生多种淋巴因 子，促进NK、CTL、LAK等杀伤细胞活性。该试验为移植术前后检 测供体与受体相容性的常规检测手段【631。鉴于抗CD40L单抗在特异 性免疫应答中的阻断抑制作用，故采用MLR实验以观察mAblB1和 mAb4F1的阻断效应^ 互作用，是功能阻断型单克隆抗体，尤其是mAblBl抑制作用更明 显。 f 细胞免疫应答中的作用提供了良好的手段，也为探索移植排斥和自 身免疫的免疫干预提供有效的生物制剂，具有重要的开发和应用价 值。3 关键词：cD40配∥CD40杂交瘤单克隆抗体V Daudi细胞‰合淋巴细胞反应自身免疫 移植排斥∥。 垒里!坐曼! 一—— anti-humanCD40 two of ligand Preparation