两个由hsv-诱导的人成纤维细胞est差异片段的初步分析.pdfVIP

前言 一个细胞的基因转录表达水平能够精确而特异地反映其类型、发育 阶段以及反应状态，也就是浼．在发育进程或与外界相互作用过程中， 细胞的大多数基因产物都在多个时间和空间表达并发挥其功能，所以阐 明生命不同阶段和不同环境中基因表达的时空分布对于理解基因功能是 十分重要的。人类基因组约出3-5万个左右的不同基因组成，这些基因 的选择性表达决定了机体整个生命过程，基因表达的变化处于控制生物 学调节机制的中心位置。因此，研究细胞或机体不同发展阶段和不同环 境中的基因表达变化，了解它们表达的时空方式和表达的特异性，进行 不同生理或病理条件下蛋白质的比较分析，不仅有助于认知特殊环境中 细胞或机体反应的机制，而且还能为进一步开展疾病的基因诊断和基因 治疗提供重要的理论依据。 人们知道，病毒感染特异宿主细胞是其增殖的必经途径，这个过程 是以病毒与其在细胞上的受体相结合开始的，这种识别与结合对于二者 的命运具有特殊的意义。研究表明，这个特定的时期使病毒和细胞本身 产生了结构和功能的改变，从而决定了它们之间是一种相互作用的关系。 病毒与受体结合的初期，病毒可以看作是一种外来的信号分子，能够和 正常生理配体一样使受体发生活化，并激活相应的信号传导成分，使其 所携带的特定信号传入核内，表现出一定的转录激活现象。同时，其间 的相互作用不仅仅是外界信号的传递和反馈，更重要的意义是在于保证 病毒增殖过程与细胞本身基因反应的相互配合。细胞在与病毒的相互作 用过程中，多数蛋白都在这个特定的时间和空间表达并发挥其功能，形 成基因表达的多效性。从这个层面上说，基因的表达模式只有在病毒一 中强轿和医斟大学中强器攀辩掌筏囊士学位论童 细胞相互作用的调控网络的大背景下。才会有真正的意义。所以，在分 子水平上从整体的角度分析病毒一细胞相互作用状态下细胞内动态变化 的差异基因表达，了解基因表达调控的相互作用与联系，对于揭示病毒 感染细胞这一特定时期的基因和蛋白质的功能，阐明相关疾病的分子机 理及发现靶分子、辅助药物设计具有重要意义。 单纯疱疹病毒(HSV)是一种具有较强传染性的病原体，它是一种结 构复杂的双链DNA病毒，至今尚无大规模疫苗使用。由于其致病与年龄、 性别、社会经济状况、卫生水平及环境因素等有关，且呈现出特殊病理 学过程～神经节及上皮细胞的潜伏感染和反复发作，以及某些潜在的致 癌特性，因此成为病毒学研究中的热点。它具有多种表现抗原性的蛋白 成分，在细胞内的复制过程中与宿主细胞之间表现有多种相互作用。日 J；i『的研究已为这方面的工作积累了大量的资料，在这些工作中，HSV与 受体的相互作用所导致的细胞差异基因表达的分析研究尚是一个新的领 域。但许多实验已经提示，HSV感染不同细胞后会形成不同的感染过程 及不同的感染结果的最为关键的原因就是HSV结合受体后所诱导的不同 细胞所产生的基因反应各异，而这些不同的基因反应产物对HSV进入细 胞后的感染过程有直接的影响，因此导致了病毒感染可能走向不同的结 局。 目前，越来越多的研究者认识到，作为对DNA和蛋白质序列资料中 各种类型信息进行识别、储存、分析、模拟和传输的学科，生物信息学 已经显著地改变了遗传学、分子生物学、结构生物学、发育生物学、免 疫学和微生物学等基础科学的实践，而且有可能带来药物学和医学的重 大革命。基因组生物信息学已大量运用于基因的发现和预测，尤其是利 用生物信息学去发现基因的蛋白质产物的功能得到了更为广泛的运用。 然而，在环境和细胞的相互作用研究中，利用生物信息学去分析基因和 比较基因表达谱也许更为重要。不同时相、不同状态下细胞的基因表达 图谱的构建、生物体中越来越多的SAGE标签单位的分离识别等各项研究 成果，无疑为基因表达图谱的搜寻和家族的分类提供了极其宝贵的信息。 诚然，生物信息学对基因和蛋白质家族的识别将为理解编码序列的功能 提供重要依据，但利用计算机模拟所获得的理论数据，还需经过实验结 果的验证和修正。 基于上述的的研究背景和资料，我们认为在病毒和细胞相互作用环 境中细胞反应的研究工作中，研究重点应该是比较在正常状态和病理状 态下的细胞中的基因在表达数量、表达位置的差异，从而发现与病理改变 有关的基因和疾病特异性基因，进一步分析差异基因编码蛋白在细胞内 的功能意义。据此，我们运用基因差异表达分析与生物信息学相结合的 研究手段，辅之以经典分子生物学的实验方法，采用mRNA差异显示一差 异EST序列分析与拼接一基