单纯疱疹病毒1绿色荧光蛋白真核表达系统的构建及初步应用.pdf

中文摘要 单纯疱疹病毒1型绿色荧光蛋白真核表达系统的构建及初步应用 中文摘要 目的构建人单纯疱疹病毒1型(herpessimplex fluorescent (green protein，GFP)真核表达系统，用于HSV感染的快速诊断。 方法提取HSV．1DNA，利用DNAStar软件设计刺‘应于HSV—lSM44株ICP6 (400ug／m1)筛选阳性细胞克隆，进行放大培养建立稳定转染细胞株 细胞诱导表达的特异性。 细胞经HSV一1诱导感染，最早于6h即可在倒置荧光显微镜F检测到GFP绿色荧光， 随着时间的增加，GFP荧光的量及强度逐渐增加。流式细胞术检测结果表明，GFP 荧光的量及强度随HSV一1病毒的滴度增加雨增加。人巨细胞病毒和柯萨奇病毒感染 Vero—ICP6．EGFP细胞后6h、10h及24h，均未检测到特异性荧光出现。 结论本研究建立的人单纯疱疹病毒l型 绿色荧光蛋白真核表达系统，具有甲 期、快速、灵敏等优点，特异性较高，进一步完善后有望用于HSV．1感染的诊断， 以及抗病毒药物的筛选。 关键词人单纯疱疹病毒1型；启动子ICP6；真核表达：绿色