骨桥蛋白特异性irna慢病毒表达载体的构建及其在u251胶质瘤细胞中沉默效应的鉴定.pdfVIP

骨桥蛋白特异性siRNA慢病毒表达载体的构建及其在U251胶质瘤细 胞中沉默效应的鉴定 中文摘 要 目的观察慢病毒表达载体介导的小干扰RNA对人神经胶质瘤细胞U251OPN表 达的影响，为后续的以OPN基因为靶点的神经胶质瘤基因治疗研究奠定基础。 1．O、 2．0共转染293T细胞，包装产生慢病毒颗粒并测定病毒滴度。将包装产生 pHelper 法鉴定蛋白表达；噻唑兰比色(MTT)法检测OPN受干扰后U251细胞的增值能力 的影响；Transwell体外侵袭实验观察干扰后细胞侵袭能力的变化。 shRNA 结果1．成功构建针对OPN基因的慢病毒干扰载体LV．OPN 2．慢病毒感染U251细胞后，OPN基因mRNA和蛋白的表达量与未感染慢病 毒的细胞组及空载体感染组相比均明显下降。 3．在增殖实验中，慢病毒干扰载体LV．OPNshR2qA细胞组的增殖能力与 空载体对照组和未转染组相比有明显下降，差异有具有统计学意义。 4．在Transwell