ARMS法检测解读.pptVIP

ARMS技术优点 ARMS方法检测灵敏度明显高于直接测序法等其他方法（表1），可检测出样品中含量低至0.1-1.0%的突变基因；该方法在设计上可以最大限度地缩短目标产物的长度，可以解决石蜡包埋组织标本提取的DNA大部分片段化而无法得到准确检测结果的难点；该方法结合实时PCR平台实现扩增时闭管操作，操作简单，无需产物的后处理，能最大程度地避免扩增产物的污染。 表1 ARMS法与测序法比较 实时荧光定量PCR ARMS技术利用特异引物对突变靶序列进行高精准PCR扩增放大，与此同时，利用探针对扩增产物进行检测，在实时荧光定量 PCR平台上实现对样品DNA中稀有突变的检测，以达到对基因突变检测的高特异性和高灵敏度。 该技术所用探针为 Scorpion 探针， Scorpion 探针是一种新型的探针， 由一条发夹结构的探针和一条引物构成， 探针的 5 端和 3 端分别标有报告荧光和淬灭荧光， 3端通过PCR blocker（一个非扩增的单体 , 防止探针退火后的延伸）与引物的 5 端相连。 在自由状态， 报告荧光和淬灭荧光很接近， 不产生荧光。 变性阶段茎环结构打开， 退火时引物与模板结合并延伸， 环区与新合成的目的基因的互补区域结合， 此时 Scorpion 探针与 PCR 产物在同一条 DNA 链上， 是分子内的结合。 由于发夹结构打开， 报告荧光和淬灭荧光分离， 因此可检测到报告荧