武夷菌素产生菌CK-15细菌人工染色体（BAC）文库构建.pdfVIP

摘 要 农用抗生素武夷菌素(Wuyiencin)是一种广谱、高效、低毒的核苷类农用抗生素，它对农作 物的白粉病、番茄叶霉病、番茄灰霉病等真菌病害有良好的防治效果。目前武夷菌素产生菌经过 诱变、原生质体融合等技术的改造后，其效价已经大幅度的提高，但仍不能满足大规模生产的要 求。因此鉴定、分离和克隆武夷菌素产生菌表达产物和调控相关的功能基因，并通过基因改良的 方式进行武夷菌素产生菌分子定向育种，来提高武夷菌素的效价及产量变得非常重要。 分离鉴定抗生素合成相关基因的传统策略有突变与互补基因分离、表达文库免疫筛选分离、 基因组文库筛选及抗性基因连锁标记的分离等，上述几种克隆抗生素合成基因的策略都需要构建 文库与其他几种文库相比具有容量适中、稳定性好、嵌合率低、容易分离等特点。成功构建BAC 文库是鉴定、分离和克隆武夷菌素合成相关基因的基础。 1：本实验测定了武夷菌素产生菌CK-15菌株的16SrDNA序列并构建系统发育树，分析后得 rDNA相似性高达99．5％，明确武夷 出：CK-15菌株与小白链霉菌(Streptomycesalbulus)的16S vat． wuyiensis)。 S．等的BAC文库构 2．以武夷菌素产生菌CK-15菌株为材料，参照ZhangHB．和Margherita 建方法，并作了一些改进，建立了一套高效的武夷菌素产生菌BAC文库构建技术体系。体系包括 高分子量DNA获得、部分酶切最佳条件的确定、片段大小选择的方法、高效的连接转化体系等。 3．利用所建立的高效BAC文库构建技术体系，以pCCIBAC为载体，构建了基因组覆盖率 6．45倍的小白链霉菌武夷变种CK-15BAC文库，这是国内外首次构建小白链霉菌武夷变种进行 色克隆进行NotI酶切分析表明文库克降的平均插入大小为121kb，空载率小于1％，文库覆盖率 为99．85％。关于BAC文库阳性克隆的筛选及进一步研究还需要在日后的工作中完成。 CK-15BAC文库的构建为开展武夷菌素产生菌重要性状基因的图位克隆、物理作图、基因组 测序、功能基因研究等应用提供了重要基因组资源，为使用基因工程手段对武夷菌素产生菌进行 分子定向育种奠定了基础。 关键词： 武夷菌素，16SrDNA，高分子量DNA，细菌人工染色体文库 Abstract antibiotics isakindof efficiency，low Agricultural Wuyiencin broad-spectrum，hightoxicity nucleoside cancontrol diseases of agriculturalantibiotics，whichfungus effectively．Theproduction Strainshasbeen enhancedthe of Wuyiencin’S through Producing greatly technique 80 fusionand stillcannotmeetthe of scale on．however，it requirementslarge is offunctional to the of strainthemethods important improveproductionWuyienci